中国人群CYP2D6基因多态性的基因芯片测定及其对曲马多与美托洛尔代谢性相互作用的影响
细胞色素P4502D6(cYP2D6)是一种重要的药物代谢酶，参与临床近百种重要药物的代谢，而且对药物的代谢呈现出明显的个体差异和种族差异，这是造成临床用药个体差异的重要原因。CYP2D6是最具有基因多态性的药物代谢酶，目前己发现有七十多个变异位点。本研究拟制备基因芯片，测定中国人群CYP2D6基因多态性的分布频率，并研究不同基因型的中国健康志愿者体内曲马多和美托洛尔的代谢特点及其对两药相互作用的影响。
1．基因芯片法测定中国人群CYP2D6基因多态性
根据CYP2D6基因序列的多态性分布特点，针对在中国人群药物代谢中具有潜在作用的突变位点C188T和G4268C(CYP2D6*2和CYP2D6*10)，设计寡核苷酸探针，制备寡核苷酸芯片，测定312例中国健康志愿者CYP2D6的基因型，并使用直接测序法对分型结果进行验证，探讨基因芯片技术应用于CYP2I)6基因分型的可行性。结果312例中国健康志愿者中CYP2D6*2和CYP2D6*10的变异频率分别为CYP2D6*2W*10w 8.3％，*2H*10W 13.5％，*2M*10W *10.69，0，*2M*10H 17.0％，*2M*10M 34.6％，*2H*10H 9.6％，*2H术10M 6.4％。对部分样本采用直接测序的方法进行进一步确证，结果完全吻合。说明本研究建立的基因芯片适用于中国人群CYP2D6基因分型研究。
2．中国人群CYP2D6基因多态性对曲马多药代动力学的影响按照变异位点，筛选40例健康志愿者，分为四组进行试验，每组10人。第 一组：CYP2D6*2W*10W，第二组：CYP2D6*2H*10W和CYP2D6*2M*10W，第三组:CYP2D6*2M*10H,第四组:CYP2D6*2M*10M。各组健康志愿者单剂口服曲马多100 mg后,采集24 h内不同时间点的血样和尿样,使用高效液相色谱法测定血浆和尿液中的曲马多及其代谢产物O-去甲基曲马多的浓度,计算药代动力学参数,比较不同基因型志愿者体内曲马多药代动力学的特点,分析中国人群CYP2D6基因多态性对曲马多药代动力学的影响。测定曲马多的代谢表型,在体内验证基因芯片的分型结果,考察曲马多作为中国人群CYP2D6新型探针药物的可行性。结果表明,CYP2D6*2的变异对于曲马多的药代动力学过程没有影响,CYP2I)6*2M*10H对曲马多的代谢活性与CYP2D6*2W*10W相比显著降低,CYP2D6*2M*10M的代谢活性更低,呈现基因剂量效应,CYP2D6*10位点的变异是影响曲马多药代动力学的主要因素,CYP2D6的基因型是CYP2D6代谢表型的主要决定因素。3.中国人群CYP2D6基因多态性对曲马多与美托洛尔代谢性相互作用的影响选择参加曲马多单剂药代动力学试验的四组健康志愿者,每组志愿者在第1日单次口服100mg酒石酸美托洛尔片,采集24h内不同时间点的血样和尿样。使用高效液相色谱法测定血浆和尿液中的美托洛尔及其代谢产物α-羟基美托洛尔的浓度,计算其药代动力学参数。自第3日起,联合服用50mg盐酸曲马多片和50mg酒石酸美托洛尔片,连服5日,最后一日同时服用100 mg盐酸曲马多片和100 mg酒石酸美托洛尔片后,采集32小时内的血样和尿样,使用高效液相色谱法测定血浆和尿液中的曲马多及其代谢产物O-去甲基曲马多、美托洛尔及其代谢产物α-羟基美托洛尔的浓度,计算药代动力学参数,从以下几个方面进行分析比较:
(1)联合服药前后,不同基因型志愿者体内美托洛尔药代动力学的改变;
(2)联合服药前后,不同基因型志愿者体内曲马多药代动力学的改变;
(3)CYP2D6基因多态性对曲马多与美托洛尔代谢性相互作用的影响。
通过上述比较,说明CYP2D6*10的变异对于中国人群美托洛尔的体内药代动力学过程具有显著影响。CYP2D6*2M*10M与CYP2D6*2M*10H志愿者相比药代动力学参数变化更加明显,具有一定的"基因剂量"效应,CYP2D6基因型是CYP2D6代谢表型的主要决定因素。美托洛尔和曲马多联合服用后，美托洛尔和曲马多的药代动力学参数与单独应用时相比，均有显著性差异，说明两药合用存在竞争性抑制作用，使美托洛尔和曲马多的代谢均减慢。而且CYP2D6*2W*10w基因型志愿者的药代动力学参数改变最大，CYP2D6*2M*10M基因型志愿者的药代动力学参数改变最小。说明中国人群CYP2D6的基因多态性对于美托洛尔和曲马多的代谢性相互作用具有显著性的影响。本研究建立的基因芯片具有简便、快捷、灵敏度高等特点，适用于中国人群大批量的cYP2D6基因分型研究，具有重要的实用价值。本研究从基因水平探讨了药物作用个体差异的机制，阐明了药物代谢性相互作用的机制，研究了中国人群药物代谢酶CYP2D6的基因多态性与药物代谢的关系，对于新药的研发、安全性评价以及指导临床合理用药，最终实现个体化给药具有重要的理论意义和实用价值。
基因多态性;曲马多;美托洛尔;基因芯片
中国海洋大学
博士
水产品加工与贮藏
王睿
2006
中文
Q78
119
2007-08-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）