漠斑牙鲆的种质资源研究
本文以漠斑牙鲆(Paralichthys letostigma)引进种群为材料，采用染色体组型研究、同功酶电泳技术、随机扩增多态性DNA(RAPD)技术和线粒体DNA序列分析技术，对漠斑牙鲆的种质资源进行了研究。主要结果如下：
通过对漠斑牙鲆进行核型分析，发现漠斑牙鲆核型公式为2n=48，48t，染色体臂数为NF=48，未发现有多倍体的现象，也未发现性染色体和随体。通过计算染色体的相对长度，发现漠斑牙鲆的染色体相对长度在3.15±0.26与5.52±0.35之间，两相邻的染色体的相对长度差异不大。还比较了漠斑牙鲆的核型与其它牙鲆属鱼类核型，发现它们的核型相似，漠斑牙鲆与中国褐牙鲆的近交的可能性很大，所以在促进漠斑牙鲆养殖业的发展的同时，也要促进两个物种的资源调查工作和加强遗传多样性的保护。
采用聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳技术，对漠斑牙鲆的遗传多样性进行了同功酶检测。分析了48个样本的15种同工酶在漠斑牙鲆肌肉和肝脏两种组织或器官中的表达情况。15种同工酶共记录了33个基因位点，其中Me-1，4dh-1，Sdh-1，Sdh-2，Gdh-1，G6pd-1，Pgm-1，Idh-1，Cat-1，Pod-1和Pgi-1共11个位点是多态的，多态位点百分数是33.3％。平均每个位点的等位基因的有效数目A<,e>为1.2196，预期杂合度H<,e>为0.1219，实际杂合度H<,e>为0.1547。同时还分析了漠斑牙鲆各个多态位点的Hardy-Weinberg遗传偏离指数d。通过同功酶技术检测得出，漠斑牙鲆具有较高的遗传多样性，其种质资源处于良好的状态。
运用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对引进种群漠斑牙鲆的遗传多样性进行了分析，筛选的40个10 bp的随机引物中，25个引物产生了稳定性好，可重复性强的谱带。25个引物共检测到154个位点，其中多态位点有122个，多态位点的比例为79.22％，有效等位基因数为1.5629±0.3631，Nei's基因多样性指数为0.3184±0.1843，Shannon信息指数是0.4651±0.2574。所有的结果同样表明了漠斑牙鲆的遗传多样性处于较高的水平，种质资源良好。
除了以上的实验技术外，还随机抽取了6个个体对漠斑牙鲆的线粒体基因的16S rRNA基因片段，COl基因片段、Cyt-b基因片段及D-loop基因片段四段基因进行了PCR扩增和测序。分别得到了约633 bp、581 bp、436 bp和560 bp的碱基序列。16S rRNA基因片段,COI基因片段和D-loop基因片段三段序列分别获得两种单倍型,Cyt-b基因片段序列获得三种单倍型,均已在Genbank中注册(注册号码为:QD450961-QD450969)。利用这四对引物获得的序列同源性高,个体间差异不显著,只有个别位点出现了变异现象。四段序列的平均A+T的含量均大于G+C的含量。本实验还将获得的序列与鲽形目的其它6种外源物种的相应序列进行了比较,运用DNAsp软件对漠斑牙鲆与外源物种的相应序列进行了比对,统计了各物种相应序列的插入/缺失位点、单态位点、多态位点和简约信息位点等数据,结果表明16S rRNA序列中出现88个插入/缺失位点,单态位点157个,多态位点394个,简约信息位点355个,序列的同源性为69.94[％];COI序列中出现910个插入/缺失位点,单态位点448个,多态位点133个,无简约信息位点,各序列的同源性为68.67[％];Cyt.b序列中出现584个插入/缺失位点,单态位位点183个,多态位点124个,简约信息位点90个,各序列的同源性为70.31[％];D-loop序列中出现373个插入/缺失位点,单态位点42个,多态位点178个,简约信息位点116个,各序列的同源性为48.85[％],插入/缺失位点数较多可能与所选取的外源序列较短有关,如COI序列。利用MEGA 3.1软件计算了各物种的遗传距离并构建了NJ和MP系统树。结果表明所实验的漠斑牙鲆与褐牙鲆同源性高,在系统树中出现漠斑牙鲆与褐牙鲆最先聚为一支,而且通过两种系统树所得的系统分化关系得结果是一致的,进而验证了试验数据的准确性。
以上的数据为进一步研究漠斑牙鲆引进种群的种质资源提供了基础数据。
漠斑牙鲆;种质资源;遗传多样性;同功酶检测
中国海洋大学
硕士
渔业资源
刘萍;高天翔
2006
中文
S965.3;S932.4
98
2007-08-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）