石鲽（Kareius bicoloratus）繁殖内分泌功能及其调控机制
鱼类性腺既是产生配子的场所，也是重要的内分泌器官。在鱼类性腺发育成熟和排放过程中，性腺产生的性类固醇激素通过反馈作用来协调脑垂体促性腺激素(GtH)适量的合成与释放。与之同时，垂体细胞和血液中性激素含量都呈现规律性变化。本研究运用组织学和免疫组织化学方法对石鲽(Kareius bicoloratus)性腺和垂体进行了系统的研究，并采用双抗体放射免疫测定法(RIA)测定繁殖季节注射外源激素LHRH-A后石鲽血清睾酮T和雌二醇E<,2>的含量变化。
1．石鲽性腺周期发育的组织学观察
石鲽卵巢一对，呈三角戟状。未成熟卵巢呈淡黄色或淡红色，成熟卵巢米黄色或橘红色。卵巢的发育分为6个时期，卵细胞发育分为5个时相，其中卵原细胞和精原细胞用组织学难以区分，2时相卵母细胞胞质内出现卵黄核；3时相卵母细胞卵黄开始积累；4时相卵母细胞出现两层滤泡细胞；4时相后期核开始偏位，胚基出现；5时相成熟卵细胞胞核消失，呈游离状态；Ⅵ期卵巢内卵黄颗粒融合成块状，并开始退化吸收；处于恢复期(Ⅱ期)的卵巢很容易被苏木精然成深蓝色。各个时期的卵细胞核仁数量，胞膜厚度及细胞体积变化很大。石鲽精巢和卵巢一样，成对，未成熟精巢线状、半透明，成熟精巢膨大的软体状、乳白色。石鲽精巢小叶型。精巢的发育分为6个时期，精细胞的发育经历精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞和精子。其中ⅡⅠ期精巢包含了所有精细胞；Ⅳ期精巢精细胞的发育高度一致；Ⅴ期精巢细胞数量达到顶峰。
2．石鲽性腺免疫组织化学观察
石鲽性腺的免疫组化显示，Ⅰ-Ⅵ期的卵巢对雌二醇(E<,2>)及雌激素受体(ER)都显免疫阳性反应，其中卵黄生成前期和卵黄生成期E2表达最强，主要分布在胞质、核质和核膜。而在卵黄形成后期和趋于成熟的卵母细胞中雌二醇表达减弱，主要分布在胞质、滤泡细胞、核质和卵黄颗粒，核仁也有表达。ER在卵母细胞中的分布和E<,2>相似，只是在成熟期较E<,2>反应强些。
E<,2>和ER在精巢各个时期的分布几乎完全一致，说明了E<,2>通过ER作用于精细胞发育的各个时期。在精巢Ⅰ期，生精细管、生殖被膜和间质细胞都呈阳性反应，精原细胞也有E<,2>表达；Ⅱ-Ⅲ期，E<,2>的表达变化不大，推测E<,2>可能在精母细胞的减数分裂中起直接调控作用；Ⅳ-Ⅴ 期，精子尾部及核周呈阳性反映，推测E<,2>在精子的变态和维持成熟精子的功能中起作用，且E<,2>具有防止未变态精子细胞调亡的作用。雄激素受体(AR)在卵母细胞和精母细胞发育的各个时期都有较强的反应，而且由早期性细胞到成熟细胞逐渐增强。Ⅰ-Ⅲ期卵巢中AR在卵原细胞中表达较强，主要分布在胞质和核膜，核质也有表达。Ⅳ-Ⅴ期卵巢AR显强阳性反应，卵黄颗粒膜和滤泡细胞呈强阳性反应，核呈阳性反应。
AR在Ⅰ-Ⅱ期精巢有表达，胞质和核膜呈免疫阳性，核质呈弱阳性反应；Ⅲ一Ⅳ期表达加强，精子细胞呈强阳性反映，特别是核周阳性最强，表明T在促进精母细胞减数分裂和精子细胞变态中发挥作用。Ⅴ期的精子呈强阳性反应，精子尾巴、核及核周均呈强阳性反应，表明T 在精子成熟中发挥重要作用。
总之， E<,2>、ER和AR在性腺中的反应部位和程度随性腺及性细胞的发育而变化。分布于胞质、胞膜、核质、核膜和核仁的不同部位，精巢还分布在间质细胞。
3．石鲽垂体组织学和免疫组织化学的观察
石鲽脑垂体鸡心形,由神经垂体和腺垂体两部分组成。腺垂体又包括前外侧部(RPD)、中外侧部(PPD)和垂体中间部(PI)。神经纤维束延伸至腺垂体的各个部分。采用HE、Jafri、 HA、Mallory、PAS染色法，结合免疫组织化学方法，对石鲽脑垂体的6种内分泌细胞进行鉴定和定位。RPD部主要为PRL和ACTI-I两种细胞。PPD部有4种类型细胞，分别为GH、GtH、TSH和嫌色细胞。PI主要有MSH细胞。各细胞含量特别是GH和GfH细胞随性腺的发育而变化，GtH在性腺成熟期达到高峰。GH，TSH免疫组化显示GH细胞分布较广，tSH在生殖期含量较高，且分布比较集中。
4．繁殖季节石鲽血清T和E<,2>对注射外源激素LHRH-A的反应性
雄鱼注射LMRH-A，处理后6h血浆T含量明显上升，12h、24h缓慢下降，48h时显著回升，几乎为处理前的8倍。对照组T的变化趋势和注射组不同，处理后6h显著降低(p<0．05)，12h稍微有所回升，24h、48h继续显著升高，远远大于Oh含量，但低于注射组同期含量。雌鱼注射L,HRH-A，处理后6h时血浆E<,2>水平明显下降，12h时降到最低值，24h时略有回升，48h继续回升但尚未达到处理前水平。
石鲽性腺;脑垂体;性类固醇激素;免疫组织化学
中国海洋大学
硕士
水产养殖
温海深
2006
中文
S965
86
2007-08-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）