猪呼吸与繁殖综合征抗体检测竞争ELISA试剂盒研究
实验采用杂交瘤技术研制了抗PRRS N蛋白的单抗克隆抗杂交瘤细胞株，应用间接ELISA和阻断ELISA对杂交瘤细胞进行了筛选，筛选到3株特异较高的分泌抗PRRS抗体的单克隆细胞株，并应用小鼠制备了含单克隆抗体的腹水，应用PET30b质粒克隆表达了PRRS N蛋白，对杂交瘤细胞培养上清、及表达抗原进行了定量标化，应用单克隆抗体及基因工程抗原建立了检测猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒抗体的竞争ELISA检测技术，对检测的限值、检测特异性，敏感性，进行了研究，并和目前检测效果得到国际认可的IDEXX检测PRRS试剂盒进行了比对检测，对30头SPF猪人工攻毒前及攻毒后5天，12天，29采集的血清及95份临床血清的检测结果，证明建立的竞争ELISA检测技术可以在人工攻毒第五天的血清中检测到PRRS抗体，敏感性高于间接ELISA检测方法，竞争ELISA的检测阴阳性限值为40％，检测美洲株PRRS抗体和美国IDEXX间接ELISA检测结果符合率在93％以上，检测SPF血清和人工攻PRRS美洲株病毒29天的抗体阳性血清时，检测符合率为100％。所建立的竞争ELISA检测技术不具有区分美洲株和欧洲株PRRS病毒抗体的能力，目前只能用于美洲株抗体的检测。检测其他猪病标准阳性血清的结果显示，建立的竞争ELISA检测技术与其它猪病没有交叉反应，检测特异性为100％，本研究所开发的检测技术及试剂已制备猪呼吸与繁殖综合征抗体检测竞争ELISA试剂盒，已申报农业部新兽药证书，并且已通过文字材料审查。
繁殖障碍;竞争ELISA;单克隆抗体;杂交瘤细胞;克隆表达临界值
中国海洋大学
硕士
海洋生物
包振民
2006
中文
S858.28
37
2007-08-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）