碱性蛋白酶产生菌株Aeromonas CYL-7的选育及产酶研究
本文从烟台近岸的海水中筛选获得一株产碱性蛋白酶的细菌，经鉴定属于气单胞菌属(Aeromonas)。该菌能在4～45℃范围内生长，生长的pH范围为pH7.0-10.0，菌的生长不需要海水或NaCl，但0.2～1.0％的NaCl对其生长、产酶有利。
通过对初筛菌株进行紫外诱变和EMS化学诱变，结合利福平抗性菌株的筛选，最后得到突变菌株AeromonasCYL-7。
初步探讨了菌株CYL-7产碱性蛋白酶的诱导性及酶的分泌性，以此为基础，采用了不同营养成分的培养基，并实验了几种对产酶有促进作用的诱导物质。结果发现菌株CYL-7只能利用有机氮源产酶，适当添加诱导物利于产酶；所产蛋白酶为胞外酶，酶合成模式属于滞后合成型，大量收获在菌体生长的稳定期。
通过正交实验确定发酵培养基的最佳组成：4.0％玉米粉、2.0％麸皮、0.5％葡萄糖、1.5％豆饼粉碱水解液、0.5％酪蛋白、0.5％氯化钠、0.1％氯化钙、0.1％氯化锰、0.4％磷酸氢二钠、0.03％磷酸二氢钾；确定最适发酵条件为：起始pH8.5、培养温度30℃、种龄12h、接种量4％、300ml三角瓶中装入50ml发酵培养基，摇瓶转速160rpm，发酵时间48-72h。综合最佳的培养基组成和培养条件，最终碱性蛋白酶活达7800U/mL。
该酶作用的最适pH为10.0，pH8.0～12.0的范围内较稳定；pH10.0保温60min酶活力维持在80％以上。最适温度为60℃，在55℃以下范围内，该酶具有良好的稳定性；70℃处理40min酶活力完全丧失。钙离子有明显的提高酶热稳定性的作用；该酶有一定的耐氧化能力；SDS、尿素及乙二醇对酶活力影响不大，而EDTA则明显抑制酶活力。其米氏常数Km为4.45ug/ml，最大反应速度Vm为14.36ug/min。
碱性蛋白酶;诱变选育;酶学性质
中国海洋大学
硕士
水产品加工及储藏工程
管斌
2005
中文
S917.1
82
2006-07-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）