海洋来源真菌KLEB-07、H2-O2和WZ4-F22次级代谢产物抗肿瘤活性成分研究
本实验从青岛近海海域采集了24个海泥样品，有选择的从中分离得到183株真菌。采用小鼠乳腺癌细胞tsFT210，以细胞周期抑制、细胞凋亡诱导及坏死性细胞毒活性为指标进行活性筛选，共得到有显著抗肿瘤活性的真菌14株，筛选结果表明海洋真菌在该筛选模型下活性率为9％。该筛选工作为实验室研究提供了重要的菌种资源。
选择3株具有较强细胞凋亡诱导和坏死性细胞毒活性的真菌KLEB-07，H2-02和WZ4-F22，分别对其进行了稳定性实验、萃取实验和时效曲线实验，确定了菌株的最佳发酵条件。依照预实验的结果，发酵到第7天的菌株次级代谢产物用有效萃取溶剂乙酸乙酯萃取，对得到的活性浸膏利用流式细胞术结合显微镜观察细胞形态的活性测试方法对其次级代谢产物的抗肿瘤成分进行了活性追踪研究，采用减压硅胶柱层析、凝胶柱层析(SephadexLH-20)、反相硅胶柱层析(RP-18)和反相制备高效液相(HPLC)等分离手段分离得到23个单体化合物。利用理化性质和光谱学方法(UV、IR、MS、1DNMR和2DNMR)阐明了19个化合物的结构(Table1)，分别为：麦角甾醇(1)，过氧化麦角甾醇(2)，24(R)-6β甲氧代-7,22(E)-麦角甾-3β，5α-二醇(3)，24(R)-3β，5α，9α-三羟基-7,22-麦角甾二烯-6-酮(4)，2',3'-dihydrosorbicillin(5)，Sorbicillin(6)，2-(4-烯-1己酮)-3,6-二甲基-5-羟基-1，4苯醌(7)，dihydrotrichodimerol(8)，trichodimerol(9)，邻二硝基苯氨(10)，1，3-二氨基-2-硝基苯(11)，1H-3-羧基吲哚(12)，乙酸-(3-羟基-5-羟甲基)-苯酯(13)，Gliotoxin(14)，Gliocladin(15)，环-(色-丙)(16)，环-(甘-脯)(17)，甲基十九烷烯酸(18)，二十一碳二烯酸单甘油酯(19)。
利用流式细胞术及SRB法分别对19个化合物的生物活性进行初步评价，结果表明，化合物1，15，18具有显著的坏死性细胞毒作用，是KLEB-07次级代谢产物的主要抗肿瘤活性成分；化合物2，4，5，6，7，8，9具有显著的细胞凋亡诱导和坏死性细胞毒活性，是H2-02次级代谢产物的主要抗肿瘤活性成分；化合物3，14，19具有显著的细胞凋亡诱导和坏死性细胞毒活性，是WZ4-F22次级代谢产物的主要抗肿瘤活性成分。
化合物10，11系首次从海洋微生物中分离，并首次报道其抗肿瘤活性。化合物1～11，13～15，18，19对tsFT210小鼠乳腺癌细胞的活性均为首次报道。
本研究通过活性追踪分离的方法，成功地分离得到代表菌株KLEB-07，H2-02和WZ4-F22次级代谢产物的抗肿瘤活性成分，证明这一模型及筛选方法可以快速准确找到海洋微生物中的活性成分，是寻找潜在药用价值活性化合物的有效手段。
本项研究工作为进一步开发应用海洋来源真菌奠定了一定的化学和生物学基础。
海洋真菌;抗肿瘤活性;甾醇类;聚酮类;苯衍生物类;环肽类;脂肪族类
中国海洋大学
硕士
生药学
崔承彬;顾谦群
2005
中文
R284
94
2006-07-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）