牙鲆胚胎的玻璃化冷冻保存的研究
本文以牙鲆胚胎为材料，研究了麦管直径、平衡温度、装卵个数等影响鱼类胚胎玻璃化冷冻保存的几个方面的内容。对牙鲆胚胎的玻璃化冷冻保存方法和条件进行了优化，特别对玻璃化液组成进行了改良，对胚胎发育时期和平衡时间进行了筛选，对胚胎的冷敏感性和冷冻损伤机理进行了探讨。
结果表明：含有多种抗冻剂的玻璃化液PMDD(2％PVP)，玻璃化稳定，脱玻璃化率较低，适宜进行玻璃化冷冻。在胚胎发育过程中，牙鲆各期胚胎对玻璃化液的适应能力不同，尾芽期胚胎较其他时期耐受力强。冻前平衡时间跟牙鲆胚胎的质量有密切的关系，一般情况下，在玻璃化液PMDD(2％PVP)中平衡40min就足以使玻璃化液渗透完全；时间延长，成活率显著降低。牙鲆胚胎在0℃与4℃下平衡的成活率显著高于15℃。非渗透性抗冻剂PVP、Ficoll可以增强玻璃化液的稳定性，降低脱玻璃化率。牙鲆胚胎具有高的冷敏感性，温度降到0℃以下，成活率显著降低；这种冷敏感性随胚胎发育阶段而变化，发育后期的胚胎比发育早期的胚胎显示出了对低温更高的耐受力。在三种规格的麦管中，直径为2.5mm的麦管脱玻璃化率最低，适宜进行玻璃化冷冻保存的研究；在1个直径2.5m的麦管中装入2-5粒牙鲆胚胎，脱玻璃化率的改变无显著差异。牙鲆胚胎的冻前平衡过程及洗脱过程的显微观察表明，抗冻剂向胚胎渗透的最大障碍是卵黄囊；牙鲆胚胎在进行玻璃化冷冻保存时，卵黄囊是极易受损伤的部位。
根据优化的条件，对牙鲆两个时期的胚胎进行超低温冷冻保存实验，共成活4次，获得成活胚胎8粒，其中7粒孵化出健康的鱼苗。本文为鱼类胚胎冷冻保存技术的建立提供基础资料，并证明了牙鲆胚胎玻璃化冷冻保存的可能性。
牙鲆胚胎;冷冻保存;玻璃化冷冻;水产养殖;胚胎发育
中国海洋大学
硕士
水产养殖
陈松林
2005
中文
S961.2
53
2006-07-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）