不同姬松茸提取物对对虾白斑病毒感染能力的影响研究
目前，对虾养殖业的发展已深受对虾病毒病的影响，而对虾白斑病毒(WSSV)病又是对虾养殖业最严重的病害之一，研究对虾白斑病毒病具有重要的科学意义和应用价值。本文利用姬松茸提取物在体外条件下对日本对虾原代淋巴细胞抵抗WSSV感染的影响作用进行了研究，旨在查清姬松茸提取物对WSSV感染的拮抗作用，为筛选出高效的抗WSSV活性物质、预防对虾白斑病毒病奠定基础。
为了获得实验用WSSV样品，本文首先通过注射WSSV粗提液感染活体日本对虾，经PCR检测对虾确实被WSSV感染后，从病虾的心脏、淋巴组织和鳃分离制备WSSV粗提液。结果发现，WSSV感染后的对虾出现体红、活动力下降等症状，于第7天全部死亡；经PCR检测，WSSV的感染率为85％。
为了在体外研究姬松茸提取物的抗WSSV活性，本文起动了日本对虾淋巴细胞的原代培养，并分别在4、25和60℃的温度下制备出姬松茸的水提物。WSSV分别与0.05％、0.1％和0.15％浓度的姬松茸水提物作用1h后，感染对虾原代培养淋巴细胞。结果表明：在体外WSSV可以侵染对虾原代淋巴细胞。三种不同的温度下制备的姬松茸水提物在不同程度上可以抑制日本对虾淋巴细胞因感染WSSV而产生的致细胞病变(CPE)。根据PCR对WSSV的检测，发现在体外三种姬松茸水提物不能完全阻止WSSV的吸附和对细胞的侵染。0.1％的25℃和60℃制备姬松茸水提物的实验组较其他实验组对WSSV的侵染有较高的抑制作用。
通过不同浓度酒精对60℃制备姬松茸水提物进一步的分离，得到5种酒精沉淀样品。通过这5种产物对日本对虾淋巴细胞的细胞毒性测试，发现用培养液中添加2mg/mL的酒精沉淀物对日本对虾淋巴细胞进行培养24h内对日本对虾淋巴细胞没有细胞毒性，培养72h后，17％酒精沉淀的提取物实验组有少量的细胞收缩变圆脱壁，50％酒精沉淀的提取物实验组部分细胞发生收缩WSSV的攻毒试验室中，随着病毒液的稀释，细胞因WSSV感染产生的CPE减弱，PCR检测当病毒液稀释30倍时，姬松茸水溶液经17％、29％和38％酒精沉淀得到的样品可以完全抑制WSSV的侵染。
日本对虾;姬松茸;对虾白斑病毒;淋巴细胞;病毒感染;提取物
中国海洋大学
硕士
海洋生物
樊廷俊
2005
中文
S945.46;S947.11
61
2006-07-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）