栉孔扇贝线粒体DNA的初步研究
栉孔扇贝Chlamysfarreri属于软体动物门(Mollusca)、双壳纲(Bivalvia)、珍珠贝目(Pterioida)、扇贝科(Pectinidae)、扇贝属(Chlamys)，主要分佃于我国的辽宁、山东半岛，属于北方的冷水种，是我国重要的经济养殖型贝类。本文采用蔗糖差速离心DNase酶消化法、碱变性法、Triton去膜法等几种常用线粒体DNA提取法，分别提取栉孔扇贝肌肉组织和性腺的mtDNA。根据扇贝材料的特点、各方法的原理、步骤、特点及效果进行了对比分析，强调了几个关键性步骤，最终建立起一套成熟、可行的操作流程。同时观察到栉孔扇贝的mtDNA大小在25kb～35kb之间，随个体出现差异。
通过对栉孔扇贝、华贵栉孔扇贝16SrRNA片段的扩增、回收纯化、测序，得到两条序列。根据序列的差异设计各自的选择性引物：HG2/SB、ZK2/SB、SAGG/SBAA，前者在华贵栉孔扇贝中扩增出310bp的片段，后两者在栉孔扇贝中分别扩增出347bp、634bp的片段。使用这3对引物可以鉴别栉孔扇贝和华贵栉孔扇贝，简便快捷，在亲代中验证正确率达100％。用这3对引物对128个正、反杂交子代进行验证，结果子代的线粒体类型与母本完全相同，说明扇贝种间杂交过程中线粒体仅仅或者主要遵循母系遗传的方式。
扩增出栉孔扇贝COⅠ基因片段，得到718bp大小的产物。使用BamHⅠ、HaeⅢ、MboⅠ、MseⅠ、RsaⅠ、PstⅠ等内切酶对36个个体的该片段进行多态性分析，仅检测到两个多态位点。随后使用DHPLC对突变位点进行验证，建立起使用DHPLC检测扇贝mtDNA突变位点的方案，并使用该方案检测相同个体不同组织的扩增产物，结果没有发现异质性现象，推测栉孔扇贝不具有类似贻贝的DUI遗传方式。
栉孔扇贝;线粒体;贝类养殖;扇贝养殖;脱氧核糖核酸
中国海洋大学
硕士
海洋生物
包振民
2005
中文
S968.3
61
2006-07-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）