牙鲆自然杀伤细胞增强因子（NKEF）基因的克隆及其表达分析

王志坚

中国海洋大学

摘要：

自然杀伤细胞增强因子(Naturalkillerenhancingfactor，NKEF)是近年来新发现的抗氧化剂家族的重要成员，它最早从人的红细胞中得到分离纯化，能够增强自然杀伤细胞的细胞毒活性，同时在保护机体蛋白质和DNA免受氧化剂损伤等方面具有十分重要的作用。本文采用快速扩增cDNA末端(rapidamplificationofcDNAends，RACE)的方法，分离和测定了牙鲆NKEFcDNA的全长核苷酸序列，5'RACE扩增分离得到了400bp左右的片段，3'RACE扩增得到800bp左右的片段，并且扩增出的目的片段都非常特异，经过凝胶回收、连接、转化、双酶切检测和测序后，剪接得到牙鲆NKEF全长cDNA序列。牙鲆NKEFcDNA全长1028bp(不包含polyA)，其中包括67bp的5'非翻译区，597bp的开放阅读框和364bp的3'非翻译区，整个开放阅读框编码198个氨基酸，NKEF蛋白分子量22kD，等电点为7.2，在第52位和173位含有两个半胱氨酸残基，和其他几种Ⅰ类抗氧化蛋白家族成员的对比可知，两个位置的半胱氨酸残基是非常保守的，并且为该族蛋白发挥其生物学功能的氨基酸区域。PCR分析表明NKEF基因在牙鲆所取组织中普遍表达，但是表达水平存在着明显的差异，并且该基因在脾脏和头肾中可以被脂多糖的诱导而表达上调，而在肝脏和小肠中则无此变化，说明了虽然牙鲆NKEF基因在牙鲆组织中均有表达，但是它们表达的模式则根据组织和刺激物的不同而不同。该基因还随着牙鲆受精卵的发育而表达水平逐渐增高。

关键词：牙鲆;自然杀伤细胞增强因子;NKEF;海水养殖;鱼类养殖

授予单位：中国海洋大学

授予学位：硕士

学科专业：海洋生物学

导师姓名：陈松林

学位年度：2005

语种：中文

分类号：S965.399

页数：46

在线出版日期：2006-07-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）