青岛文昌鱼AmphiL34、AmphiS29基因的克隆及进化分析
本文从青岛文昌鱼(Branchiostomabelcheritsingtauense)消化道cDNA文库中(本实验室保存)，分别克隆了编码核糖体蛋白L34、S29的基因AmphiL34、AmphiS29。AmphiL34cDNA全长435bp，包括33bp的5′非翻译区(5′UTR)；357bp的开放阅读框(ORF)和45bp的3′非翻译区(3′UTR)。AmphiL34cDNA编码一个118个氨基酸残基组成的蛋白质，其分子量为13.6kDa，等电点为11.44。AmphiL34具有很强的疏水性，118个残基中有46个疏水性氨基酸；含有34个碱性氨基酸和4个酸性氨基酸，分别聚集在N末端和C末端；AmphiL34还具有一个与核仁定位有关的四肽结构RXXR。这些特征都与其他动物的核糖体蛋白L34及其相似。
AmphiS29cDNA全长453bp，包括21bp的5′UTR；171bp的ORF和261bp的3′UTR。AmphiS29cDNA编码一个56个氨基酸残基组成的蛋白质，其分子量为6.6kDa，等电点为9.79。AmphiS29的碱性氨基酸和酸性氨基酸比例为10：2，与其他动物的核糖体蛋白S29类似，并具有一个锌指结构。
AmphiL34和来自其他11种生物的L34序列比较，显示其同源性为53.6-67.5％；AmphiS29和来自其他10种生物的S29序列比较，显示其同源性为66.1-78.6％。在所构建的进化树中，AmphiL34/AmphiS29都位于脊椎动物L34/S29和无脊椎动物L34/S29之间，这和广泛接受的生物系统演化地位吻合，也支持文昌鱼是由无脊椎动物进化到脊椎动物的过渡型动物，是现存的与脊椎动物亲缘关系最近的类群的假说。此外，L34/S29氨基酸序列的显著同源性证明了它们在漫长的进化过程中相当保守。
文昌鱼基因组DNA经6种限制性内切酶消化后，用DIG标记的AmphiL34/AmphiS29片段进行的Southern杂交实验表明，青岛文昌鱼基因组内有1个AmphiL34拷贝及2-3个AmphiS29拷贝。这一结果分别与大鼠7-9个L34拷贝数和14-17个S29拷贝数相比较，证明持家核糖体蛋白基因L34和S29基因在脊椎动物起源与进化过程中发生了大规模扩增，符合两轮基因(组)倍增规律。
青岛文昌鱼;AmphiL34;AmphiS29;基因克隆;系统进化;氨基酸序列;基因倍增
中国海洋大学
硕士
海洋生物
张士璀
2005
中文
Q959.287;Q785
62
2006-07-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）