环境因子和外源刺激对栉孔扇贝免疫活性的影响
近年来，贝类大规模死亡现象频繁发生，病害日益严重，已成为制约贝类养殖业发展的瓶颈问题。贝类的免疫防御系统在疾病防御过程中扮演着极为重要的角色，因此贝类免疫学的研究对解决贝类养殖中的病害问题具有重要意义。本文研究了环境因子变化和外源刺激对栉孔扇贝(Chlamysfarreri)免疫活性的影响，以期从免疫学角度了解贝类的防御机制，为扇贝病害防治提供资料。研究结果如下：
(1)分别用不同浓度(0，0.02，0.05，0.1和0.2mg/L)的Cu2+溶液对栉孔扇贝浸浴7d后，检测了活性氧(ROIs)的产生情况；同时测定了过氧化氢酶(CAT)、酸性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶(ALP)的活性。结果表明，当Cu2+在0.02mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L三种浓度条件下，ACP和ALP活性均高于对照组，但随着Cu2+浓度增加酶活有降低的趋势，当Cu2+浓度达到0.2mg/L时这2种酶活性均低于对照组。各实验组CAT活性均高于对照组，且随着Cu2+浓度增加而升高；活性氧含量的变化趋势与CAT活性变化趋势相似。实验结果说明Cu2+对栉孔扇贝的免疫活性有明显的刺激作用，且存在剂量依赖性。
(2)研究了不同浓度(1.25、2.5、5.0、10、20和40mg/L)氨氮胁迫7d后栉孔扇贝血淋巴中胞内胞外活性氧自由基(ROIs)含量、SOD和CAT活性的变化。结果表明，在较低浓度氨氮胁迫下，胞内胞外活性氧含量都随氨氮浓度升高而增加，当浓度继续增加到20～40mg/L时，胞内外活性氧含量都明显下降且低于对照组；不同氨氮浓度下SOD和CAT活性也不同，当氨氮浓度为1.25～20mg/L时，CAT活性随氨氮浓度增加而升高，当浓度增大到40mg/L时，CAT活性明显下降且低于对照组；当氨氮浓度为1.25～5mg/L时，SOD活性随氨氮浓度增加而升高，而当浓度为10～40mg/L时，酶活性显著下降。实验结果说明，适当的氨氮刺激可增加胞内外活性氧的含量，增强扇贝的两种抗氧化酶活性，但较高浓度氨氮则使胞内外活性氧的含量显著下降并明显抑制抗氧化酶的活性。
(3)利用不同pH(7.0,7.3,7.6,8.5,9.0)环境胁迫7d后，栉孔扇贝体内ACP、ALP、SOD和CAT及胞内活性氧含量(ROIs)等五种免疫指标有明显变化。结果表明：在实验范围内，当pH高于正常组(pH8.0)时，上述五种免疫指标均随pH值的增加而明显升高；当pH低于正常组时，四种酶活性均呈先上升后下降的趋势。ACP在pH7.6时酶活性上升至峰值，随后酶活性降低；ALP、SOD和CAT活性均在pH7.3时达峰值，随后酶活性降低；而胞内活性氧含量则随pH降低持续增加。实验结果说明，pH对栉孔扇贝免疫活性有明显的刺激作用，且在一定范围内随刺激强度的增加呈现免疫活性的正调节；但在高强度pH刺激下，扇贝免疫活性呈现出负调节，这种负调节可能与高强度刺激引起的免疫机能疲劳或损伤有关。
(4)测定了鳗弧菌(2×108cell/ml)注射对栉孔扇贝胞内活性氧含量和CAT,ACP和ALP活性的影响。结果表明，在注射后5h，24h，48h和72h各免疫指标都有明显变化：胞内活性氧含量在24h、48h和72h明显升高，且均高于对照组，形成抛物线趋势，在48h达到最高；血清中CAT活性均有升高趋势，但差异不显著；肝脏中ACP活性在24h、48h和72h与注射生理盐水组相比明显升高；栉孔扇贝体内ALP活性有明显升高的趋势，且在注射后24h活性达到最高，而后有所下降。结果表明，鳗弧菌对栉孔扇贝免疫系统有明显的刺激作用。
(5)研究了注射不同剂量(20ug/g和40ug/g)Vc对栉孔扇贝体内5种参与免疫防御的水解酶和抗氧化酶活性的影响。结果表明，注射Vc剂量为20ug/g和40ug/g时，在注射后12h、24h和48h，两实验组栉孔扇贝体内溶菌酶(LSZ)、ACP和ALP活性都明显升高，而SOD和CAT活性均明显降低。同时本实验发现，Vc对40ug/g组各种酶的刺激作用与20ug/g组相比存在明显滞后性，说明40ug/g的剂量已对栉孔扇贝产生毒性，需经代谢消耗一部分后才能达到最适剂量，起到抗氧化作用。本研究表明，Vc可有效增强栉孔扇贝的免疫活性，且因剂量不同而有差异。
综合本论文的研究结果表明，环境因子(Cu2+、氨氮、pH)变化和外源刺激对栉孔扇贝免疫活性均有明显影响。总体来讲，较低水平的环境变化和刺激能使栉孔扇贝体内各免疫因子活性升高，较高水平的环境变化和刺激使栉孔扇贝体内各免疫因子活性降低。但较低水平刺激下免疫活性的升高并不完全意味着免疫机能的增强或者对机体有利，而相反可能是机体在条件变化下的一种免疫代偿或者是毒物兴奋效应。而较高水平刺激下免疫活性的降低可能与机体免疫系统受损，免疫机能下降有关。
栉孔扇贝;环境因子;外源刺激;鳗弧菌;免疫防御活性;扇贝病害防治;pH环境
中国海洋大学
硕士
海洋生物学
杨爱国;戴继勋
2005
中文
S944.43;S963.73
72
2006-07-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）