海带细胞工程育苗的生产应用研究

张全胜

中国海洋大学

摘要：

传统的海带夏苗培育方法是以海带生活史为依据建立的,此方法自60年代初建立以来,延用至今.随着现代细胞工程技术的迅速发展,细胞工程育苗即配子体无性繁殖系育苗方法成为目前海带育苗生产中的崭新技术.本文主要从生产应用角度,通过对细胞系增殖特点、附苗特点的研究,系统探讨了海带细胞系扩增培养、附苗、育苗各环节的关键技术.一、细胞系扩增培养:在20L广口瓶中,接种浓度0.5g/L,提供适宜的生长条件,进行细胞系生长试验,通过回归分析得y=-0.1118+1.3108x+0.085x<'2>-0.0006x<'3>(R2=0.9985),用于估算克隆生产量(其中y是鲜重,x是天数).通过对不同密度克隆对营养盐的消耗研究,实验表明当克隆的密度较小时,N6ppm、P1ppm、每周换水一次,可满足其生长需要;克隆密度较大时,N10ppm、P2ppm、每周换水一次,可满足其生长需要.在充气悬浮培养条件下克隆的瞬时生长率明显高于静置培养.二、附苗:采苗前,将♀♂配子体克隆混合并由长光照(连续光照)转入短光照(光期L:D 10:14)培养,连续观测克隆生长情况,结果显示,进入配子体发育阶段需11天时间,细胞增加量达40％;以孢子体发生时间和发生率为指标,研究不同♀♂比例的配子体发育情况,结果显示,1:1和3:1比较接近,5:1以上配比出现了孢子体发生时间延迟、发生率降低和孤雌生殖现象;通过不同克隆喷洒量的孢子体发生密度实验,3g/帘(♀系)与孢子采苗(孢子附着密度20~25/160X)的发生密度接近;干帘喷洒、干帘浸泡和间接喷洒的采苗方法比较显示,间接喷洒法简便易行、孢子体发生整齐.三、育苗:海带细胞系育苗生产中,在采苗结束时采取附苗后静水、24h后微流水(表层流速5cm/s以下)、72h后正常流水;孢子体生长到8~16列c时开始以0.5kg/cm2的压力洗刷,随着孢子体的生长及附着力的提高逐渐增加洗刷强度和次数;同时采用常规育苗生产中的温、光、盐等技术措施,进行幼苗培育.本文还对细胞工程育苗和传统育苗的两种大孢子体主要经济性状进行统计学分析,从遗传角度证明前者种群变异程度明显小于后者.

关键词：海带;细胞系;扩增培养;附苗;育苗

授予单位：中国海洋大学

授予学位：硕士

学科专业：海洋生物学

导师姓名：唐学玺

学位年度：2004

语种：中文

分类号：S968.421

页数：34

在线出版日期：2005-08-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）