海洋真菌抗肿瘤活性菌株的筛选及Aspergillus terreus Thom菌株代谢产物中抗肿瘤活性成分的研究
我们利用小鼠乳腺癌温敏型tsFT210细胞活性筛选模型,开展了对青岛海域海水、海泥样品中海洋真菌进行分离培养、抗肿瘤活性筛选及发酵条件研究.从海泥海水样品中共分离得到207株真菌,发现其中19株显示作用不同的细胞周期抑制、细胞凋亡诱导及直接杀伤活性.在分离纯化菌株及对其进行的普遍活性筛选过程中发现,在分离海洋真菌时加入青霉素、链霉素的土豆培养基具有很好的选择培养效果,同时还发现样品采集的不同时间、地点对于真菌的菌种多样性及活性菌株的发现几率有很大关系,提示我们要增加样品采集的多样性来提高活性菌的发现几率.活性筛选结果表明海洋真菌在该筛选模型下活性率为10﹪左右,是寻找和发现活性物质的重要资源.其中一株编号为Z<,8>3200的真菌发酵产物显示非常强的细胞凋亡诱导活性,该菌株经分类学研究被鉴定为土曲菌(Aspergillus terreus Thom),该文以该菌为目标菌株进行抗肿瘤活性成分的研究.以细胞凋亡活性为指标,研究了Aspergillus terreus Thom的稳定性及发酵条件,据此条件发酵生产得到发酵液.经预试验后,用乙酸乙酯提取得到总浸膏,活性测试显示其具有较强细胞凋亡诱导活性.将提取物采用减压柱色谱(VLC)、凝胶柱色谱(Sephadex LH-20)、反相制备高效液相色谱(PHPLC)等分离方法,经活性追踪分离,得到10个化合物,利用理化性质和光谱学方法(UV、IR、MS、1D-NMR和2D-NMR)阐明了其中8个化合物的结构.生物活性测试结果表明:化合物1对tsFT210小鼠乳腺癌细胞及人慢性髓性白血病K562细胞具有极显著细胞凋亡诱导活性.诱导K562细胞发生凋亡的最低有效浓度(MIC)小于0.31μg/ml,而诱导tsFT210细胞发生凋亡的MIC值却远远小于0.078μg/ml,其对tsFT210细胞的IC<,50>值为0.15μg/ml.化合物1可能是代表总浸膏活性的化合物.化合物9对tsFT210小鼠乳腺癌细胞及人慢性髓性白血病K562细胞也显示了较强细胞凋亡诱导活性及G<,2>/M期抑制活性;化合物6对tsFT210细胞显示了较好的G<,2>/M期抑制活性,化合物7对tsFT210细胞显示了较好的细胞凋亡诱导活性.该文是目前对该菌的抗肿瘤活性成分的首次研究.利用活性追踪方式从该菌的发酵产物中分离得到了显著细胞凋亡诱导活性的新骨架化合物1,同时还分离得到其它4个新化合物、活性化合物4个.化合物1作为新的细胞凋亡诱导剂,具有很大的开发应用前景.从化合物1的生物活性以及该文相关研究结果看:海洋来源真菌的代谢产物的确不失为寻找抗肿瘤活性物质乃至抗肿瘤新药活性先导化合物的良好资源.
海洋真菌;Aspergillus terreus Thom;活性跟踪分离;细胞凋亡诱导剂;抗肿瘤
中国海洋大学
硕士
生药学
崔承彬;顾谦群
2004
中文
R979.1;Q938.8
91
2005-05-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）