白细胞介素-10重组腺病毒载体的构建、病毒的制备及表达产物活性分析

陈晓

中国海洋大学

摘要：

目的:该文利用现代分子生物学实验方法,构建mIL-10重组腺病毒载体,制备具有活性的重组腺病毒,并对表达的mIL-10的活性进行分析检测.为研究IL-10分子生物学及药理学活性奠定了良好的基础,并为细胞因子补充和添加疗法治疗哮喘和基因治疗哮喘等临床研究做好了前期准备.方法:从刺激后的小鼠脾细胞中克隆出mIL-10片段,利用pShuttle载体将mIL-10片段连入腺病毒载体,并用PCR反应和酶切反应对构建的重组腺病毒载体进行鉴定.分别从磷酸钙转染的pH值、DNA纯度、转染后培养时间和甘油休克时间等方面优化转染条件,根据最优条件,将mIL-10重组腺病毒载体转染入HEK 293T细胞,制备mIL-10重组腺病毒.分别用PCR反应验证病毒的制备和终点稀释检测法测定病毒的滴度.对mIL-10的表达量和活性,采用ELISA法进行定量和检测.结论:该文成功构建了mIL-10重组腺病毒载体,并通过对磷酸钙转染条件的优化,高效地将重组腺病毒载体转入HEK 293T细胞,并且成功表达了mIL-10细胞因子,得到了具有活性的mIL-10重组腺病毒,为下一步对哮喘等疾病的基因治疗奠定了坚实的基础.

关键词：白细胞介素-10;重组腺病毒;磷酸钙转染法;病毒制备

授予单位：中国海洋大学

授予学位：硕士

学科专业：生药学

导师姓名：于文功

学位年度：2004

语种：中文

分类号：R915

页数：53

在线出版日期：2005-05-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）