栉孔扇贝急性病毒性坏死症病毒基因克隆及核酸诊断技术的建立

艾海新

中国海洋大学

摘要：

自1997年以来山东沿海暴发栉孔扇贝(Chlamys farreri)大规模死亡现象,给中国贝类养殖业造成了巨大的损失,通过流行病学调查、病理学分析和人工感染实验已经证实是由栉孔扇贝急性病毒性坏死症病毒(AVNV)造成的.该研究利用差速离心和蔗糖密度梯度离心分离纯化AVNV后,用蛋白酶K裂解法抽提AVNV核酸,并对AVNV核酸特性进行了基本分析,结果显示AVNV是单链不分节段的RNA病毒.采用随机引物和Oligo(dT)双引物法,用SuperScriptII反转录酶合成cDNA,并克隆到pUC118质粒上,构建了AVNV核酸的部分cDNA文库,通过蓝白斑显色、PCR反应和酶切分析相结合筛选阳性重组子,测定了重组cDNA克隆的部分序列并进行了序列分析,最终从中筛选出23＃、52＃特异重组cDNA克隆.该研究所建立的AVNV的RT-PCR检测方法和PCR法制备DIG标记探针的斑点杂交检测方法是2种快速、灵敏和特异的检测AVNV的方法,发展和完善这2种技术对栉孔扇贝急性病毒性坏死症的早期诊断和防治及抗病育种具有重要意义.

关键词：栉孔扇贝;急性病毒性坏死症病毒;cDNA文库;克隆;逆转录聚合酶链反应;斑点杂交

授予单位：中国海洋大学

授予学位：硕士

学科专业：水产养殖

导师姓名：王崇明;李赟

学位年度：2004

语种：中文

分类号：S944.43

页数：64

在线出版日期：2005-05-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）