纹腹叉鼻鲀（Arothron hispidus Linnaeus）淋巴囊肿病的研究

王云忠

中国海洋大学

摘要：

运用石蜡包埋切片法、组织化学方法和电子显微镜技术,对纹腹叉鼻鲀的鳍上的囊肿物的组织病理结构和组织化学性质进行了研究.结果显示,其囊肿物是由膨大的细胞聚集而成,细胞大小380-400μm,细胞核变得不规则,核内染色质边集,细胞质边缘有点状或块状的嗜碱性、呈Feulgen和Mann氏反应阳性的包涵体,高电子密度的包涵体周围有六角形的病毒粒子,直径约200nm,是典型的虹彩病毒.细胞膜外有一厚层均质的、呈PAS反应阳性的包膜,这些病理组织特征都是鱼类淋巴囊肿病的典型特征.6月份时囊肿物已变得很小,电镜下未看到病毒粒子,结缔组织内观察到细胞的崩解和碎片,此时病鱼正处于病愈恢复期.根据牙鲆淋巴囊肿病毒的主要核衣壳蛋白序列,建立了巢式PCR技术来检测该病毒,其中外侧引物P1和P2的扩增产物大小为348bp,内侧引物P3和P4的扩增产物的大小为172bp.敏感性实验表明,巢式PCR要比常规PCR灵敏10<'7>倍.运用巢式PCR技术,检测了4月份和6月份的患病纹腹叉鼻鲀的囊肿物,结果表明4月份的样品有淋巴囊肿病毒,而6月份的样品则没有,与电镜观察结果一致.用该实验室研制的鼠抗牙鲆淋巴囊肿病毒的单克隆抗体作为一抗,对纹腹叉鼻鲀的囊肿物的冰冻切片进行间接免疫荧光抗体染色,结果在荧光显微镜下观察到囊肿细胞的细胞质发出绿色荧光,而囊肿细胞的细胞核及周围的结缔组织无绿色荧光.对囊肿物冰冻切片进行免疫金-银染色,结果显示囊肿细胞的细胞质呈阳性黑色,而结缔组织为阴性.这些结果都表明在囊肿细胞的细胞质内有淋巴囊肿病毒粒子存在.对纹腹叉鼻鲀的淋巴囊肿病进行治疗的结果显示用氯霉素、土霉素、红霉素、福尔马林药浴或注射病毒唑都无明显治疗效果.而在水族馆的24-25℃水温环境内,将水族箱内加入50ml/m<'3>过氧化氢(3﹪)进行药浴,囊肿能够缩小.

关键词：纹腹叉鼻鲀;淋巴囊肿病毒病;组织病理学;PCR技术;免疫组织化学

授予单位：中国海洋大学

授予学位：硕士

学科专业：水产养殖

导师姓名：俞开康

学位年度：2004

语种：中文

分类号：S941

页数：47

在线出版日期：2005-05-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）