水产贝类中副溶血弧菌与创伤弧菌的基因检测与分析

何闪闪

中国海洋大学

摘要：

致病微生物的快速检测与分离技术是致病微生物研究的热点之一.PCR能够快速检测食品中存在的致病微生物,是一种有效的快速检测手段.探针原位杂交技术可以有效的检测和快速分离食品中存在的致病微生物.该论文采用PCR和探针原位杂交技术分离中的副溶血弧菌和创伤弧菌.应用tlh探针和tdh探针检测分离存在于贝类样品中的副溶血弧菌,在近一个月的实验中有两次tlh探针杂交结果呈阳性,共分离出了六株tlh阳性菌株,但tdh探针的检测结果都为阴性,用PCR对分离出来的六株tlh阳性菌株进行检验,结果都为tlh阳性.运用RAPD技术对六株tdh阳性菌株进行基因分型,结果表明虽然这六株菌都为tdh阳性菌株,但在遗传物质上存在差异,其中菌株VPS与其它五株从青岛分离出来的副溶血弧菌在基因上有较大的差异,引物oligo17获得的多态性条带最多,为9条.由于国内无法将碱性磷酸酶标记到寡核苷酸探针上,采用生物素标记的探针来代替碱性磷酸酶标记的探针,经过多次的实验,得到了与碱磷酶标记的探针相近的杂交效果.对从青岛分离出来的tdh阳性菌株VP3的tdh基因进行序列分析,发现VP3与WP1的tdh基因序列完全相同,与VPS的同源性为99.5﹪.对分离到的两株创伤弧菌的vvhA基因进行克隆,经BLASTn分析表明这两株创伤弧菌的vvhA基因与菌株L-180的核苷酸同源性最高,VV1与菌株L-180的核苷酸同源性为99.57﹪,VV2与菌株L-180的核苷酸同源性99.72﹪.

关键词：PCR;探针;RAPD;副溶血弧菌;创伤弧菌

授予单位：中国海洋大学

授予学位：硕士

学科专业：水产品加工与贮藏

导师姓名：薛长湖

学位年度：2004

语种：中文

分类号：S912

页数：68

在线出版日期：2005-05-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）