产碱性蛋白酶菌株Vibrio metschnikovii DL33-51的选育及酶学性质

梅承芳

中国海洋大学

摘要：

该文以选育具有优良性状的高产碱性蛋白酶菌株及研究此酶在洗涤工业中的应用为基本目的和出发点,考查了不同因素对菌株发酵产酶的影响,对酶进行了分离纯化与性质研究,并分析了该碱性蛋白酶作为洗涤添加剂的可行性.(1)从碱湖筛选一株具有较高产碱性蛋白酶能力的菌株,经鉴定为Vibrio metschnikovii.通过紫外诱变和化学诱变提高菌株产碱性蛋白酶的能力.(2)通过单因子和正交实验确定了最适产酶的发酵培养基组成(g/L:酪蛋10.0,玉米粉10,NaCl14,NaNO<,3> 10,KH<,2>PO<,4> 1,MgSO<,4>0.5,CaCl<,2>0.1,复合生长素2.5,pH10.4);确定了最适产酶的培养条件(250mL 三角瓶中装入100mL液体培养基,26℃,150rpm振荡培养,接种量为5﹪ v/v).此培养条件下,利用最适培养基发酵40小时,发酵液的碱性蛋白酶活力为3268U/mL.(3)用1.5倍丙酮对无细胞发酵液进行沉淀,经Q-sepharose阴离子交换柱和Sephacryl S-100凝胶过滤柱分离纯化,SDS-PAGE电泳确定酶分子量为29.5kDa.(4)此碱性蛋白酶最适反应的温度和pH分别为60℃、12.0.30-40℃下酶活稳定,50、60℃的半衰期分别为7.5小时和30分钟.pH9.0-11.0缓冲液中酶活稳定.此酶具有较强的抗表面活性剂和氧化剂能力,金属离子Mg<'2+>,K<'+>,Mn<'2+>,Ba<'2+>与Ca<'2+>对酶活有促进作用,Hg<'2+>可完全抑制酶活性.丙酮精制酶4℃下冷藏250天活力基本保持不变.(5)此碱性蛋白酶与各类市售洗衣粉具有良好的配伍性,可增强洗衣粉对血污布、蛋白污布和果汁布的清除效果.该研究为碱性蛋白酶的工业化生产和在洗涤行业中的应用提供了一定理论基础.

关键词：Vibrio metschnikovii;碱性蛋白酶;酶学性质;应用试验

授予单位：中国海洋大学

授予学位：硕士

学科专业：水产品贮藏与加工工程

导师姓名：江晓路

学位年度：2004

语种：中文

分类号：Q556.9

页数：79

在线出版日期：2005-05-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）