外源基因表达载体的构建以及向斑马鱼（Dania rerio）和鲈鱼（Lateolabrax japonicus）胚胎的转移

刘洋

中国海洋大学

摘要：

该研究构建了pCMVnramp表达载体,并且利用显微注射法将不同的外源基因导入花鲈和斑马鱼受精卵内,研究了外源基因在体内的整合和表达.利用pCMVGFP和获得的真鲷(Pagrus major)的天然抗性相关巨噬蛋白(Nramp)的cDNA构建了pCMVnramp质粒表达载体,启动子为巨细胞病毒(CMV)启动子.通过显微注射的方法,将外源基因注射入花鲈和斑马鱼单细胞期受精卵动物极细胞质内,使用的外源基因包括绿色荧光蛋白(GFP)基因、Nramp基因和抗菌肽Magainin基因.每卵注射50pL外源DNA溶液(浓度为50ng/μL)是显微注射比较适宜的注射剂量.实验统计了花鲈胚胎的存活状况,注射胚胎的存活率低于对照组.实验从四种不同的启动子调控的GFP基因中筛选出了pCMVGFP,它能够在鲈鱼和斑马鱼胚胎内强烈表达.在花鲈注射实验中,注射后48小时绿色荧光蛋白就已经在胚胎内丰富表达,然而多数表达胚胎表现为镶嵌性.在斑马鱼胚胎中,注射12小时后,有微弱绿色荧光产生,至48小时也表达丰富,同样表现为镶嵌性表达的胚胎居多.随着发育的继续进行,表达GFP的胚胎数目减少.利用PCR技术检测胚胎和仔鱼体内是否存在外源基因.结果①从鲈鱼尾芽期胚胎和仔鱼的基因组DNA中检测出了GFP基因的750bp特异片段,但是没有检测出抗菌肽Magainin基因的800bp特异片段.②从斑马鱼仔鱼基因组DNA中检测出了Nramp的1700bp特异片段和微弱的GFP特异片段.

关键词：显微注射;花鲈;斑马鱼;转基因鱼

授予单位：中国海洋大学

授予学位：硕士

学科专业：海洋生物学

导师姓名：陈松林;张士璀

学位年度：2004

语种：中文

分类号：Q959.4

页数：49

在线出版日期：2005-05-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）