文昌鱼一种新卵黄蛋白原的纯化、鉴定及其免疫防御功能的研究

孙亚宁

中国海洋大学

摘要：

卵黄蛋白原(Vitellogenin,Vg)是所有卵生动物卵黄蛋白的前体,它是受激素调控的一种大分子的磷脂糖蛋白.Sun和Zhang(2001)首次报道了文昌鱼Vg的纯化鉴定,分离出一种天然状态下320kDa由同源二聚体亚基组成的文昌鱼Vg.但有关文昌鱼是否存在其它形式的Vg及Vg在机体免疫防御方面有何功能至今未见报道.该文应用Sephadex G-200葡聚糖凝胶过滤柱和DEAE-23纤维素弱阴离子交换柱两步层析从文昌鱼卵巢中分离出一种蛋白质.天然聚丙烯酰胺凝胶电泳显示其分子量为500kDa,而变性聚丙烯酰胺凝胶电泳显示它只有一条分子量为150kDa的多肽.天然电泳后的凝胶分别利用苏丹黑B进行脂蛋白染色、高碘酸-希夫试剂进行糖蛋白染色、甲基绿进行磷蛋白染色,结果显示该蛋白是一种含糖、含脂和含磷的蛋白质.此外,该蛋白还能与小鼠抗文昌鱼Vg血清发生特异性的抗原抗体结合反应.因此,我们推断该蛋白可能是一种新的文昌鱼Vg.这种新的文昌鱼Vg可能由两个分子量为150kDa的同源二聚体加上脂肪构成.这是关于文昌鱼第二种Vg形式的首次报道.利用纯化的文昌鱼Vg和双醛固定的人A,B,O血红细胞及兔,鸡,蟾蜍,草鱼的血红细胞进行凝集活性测定.结果显示文昌鱼Vg对鸡,草鱼,蟾蜍的血细胞都有凝集活性,其中鸡和草鱼的凝集效价分别达到2<'10>和2<'8>,首次证明文昌鱼Vg是一种具有凝集活性的凝集蛋白.在糖专一性抑制实验我们发现文昌鱼Vg的凝集活性能够特异性的被D-半乳糖、D-葡萄糖明显抑制,其中D-半乳糖对Vg的凝集反应抑制作用最强,最小抑制浓度为62.5mmol/L.利用单菌落计数法对文昌鱼Vg的抑菌实验表明,Vg对大肠杆菌有较明显的抑菌效果,最高抑制率可达到90﹪(Vg=390μg/ml).Vg对金黄色葡萄球菌抑制效果不明显.这是首次报道卵生动物Vg的抑菌活性.

关键词：文昌鱼;卵黄蛋白原;纯化鉴定;免疫印记;凝集蛋白;抑菌活性

授予单位：中国海洋大学

授予学位：硕士

学科专业：海洋生物

导师姓名：张士璀

学位年度：2004

语种：中文

分类号：Q959.4

页数：60

在线出版日期：2005-05-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）