牙鲆血清免疫球蛋白纯化、抗体制备及免疫组化研究
牙鲆(Paralichthys olivaceus)是中国沿海网箱及池养的一个重要鱼种,目前病害日趋严重,如大量使用抗生素会危害人类的食品安全,而利用疫苗防治疾病具有明显的优越性.因此研究鱼类免疫系统的基本结构和功能,具有重要的理论意义和应用前景.制备针对免疫球蛋白的多克隆或单克隆抗体,作为研究工具,对免疫器官中产生抗体的组织和细胞进行定位,可以了解免疫器官在防御疾病过程中是如何发挥作用的,以便对应用疫苗奠定理论基础.制备多克隆或单克隆抗体的关键就是分离纯化出尽可能多的纯度较高的免疫球蛋白,为此该文对免疫球蛋白的纯化进行了探讨,并制备了多克隆抗体和应用免疫组化方法对牙鲆的主要免疫器官进行了研究.运用两种方法对牙鲆的血清免疫球蛋白进行分离纯化,证明了Sephacryl S-200和HiTrap rProtein A Sepharose在纯化牙鲆血清免疫球蛋白的有效性,并纯化了一定量的牙鲆血清免疫球蛋白,同时测定了牙鲆血清免疫球蛋白的分子量为836kDa,其重链分子量为75.4kDa,具有分子量分别为29.9kDa和28.3kDa的两类轻链.以提纯的免疫球蛋白为抗原免疫新西兰大白兔制备了兔抗牙鲆血清免疫球蛋白多克隆抗体,用免疫双扩散法检测多克隆抗体效价1:32,免疫斑点法检测多克隆抗体效价至少为1:2000以上.运用免疫印记法检测了兔抗牙鲆血清免疫球蛋白多克隆抗体的特异性,实验证明其能与牙鲆全血清中免疫球蛋白重链、轻链反应,而与人血清IgM无交叉反应.利用自制的兔抗牙鲆血清免疫球蛋白多克隆抗体研究了产生免疫球蛋白的B淋巴细胞在牙鲆主要免疫器官中的分布.免疫组化方法检测出了牙鲆血液中产生免疫球蛋白的淋巴细胞,在牙鲆的头肾、体肾和脾的基质中都有产生免疫球蛋白的淋巴细胞存在,从数量上看头肾中最多,脾中次之,体肾中最少.研究牙鲆黏膜样淋巴组织结果显示在牙鲆的后肠中存在大量产生免疫球蛋白的淋巴细胞,主要分布于后肠的固有层和粘膜下层中,在粘膜层和粘膜层表面也偶有极少量的产生免疫球蛋白的淋巴细胞出现.
牙鲆;免疫球蛋白;纯化;多克隆抗体;免疫器官;免疫组化
中国海洋大学
硕士
海洋生物
刘云
2004
中文
Q959.4
80
2005-05-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）