壳聚糖酶菌株的筛选、发酵条件及酶性质的研究

逄玉娟

中国海洋大学

摘要：

该研究从自然界中分离筛选出一株高产壳聚糖酶的微生物菌株YJO2,经鉴定属于气单胞菌属(Aeromonas sp.).通过对菌株YJO2发酵产酶条件进行优化研究确定其最适产酶培养基组分为(﹪,w/v):粉末壳聚糖2.0,葡萄糖0.1,NH<,4>NO<,3>1.0,酵母提取物0.5,K<,2>HPO<,4>0.07,KH<,2>PO<,4>0.03,NaCl0.5,MgSO<,4>·7H<,2>O 0.05,起始pH6.0;最适产酶培养条件是:500mL锥形瓶培养基装量为150mL,2.0﹪(v/v)的接种量,30℃,150rpm培养72h.在最适产酶培养条件下,72h时菌株YJO2发酵液中壳聚糖酶活力可达到17.04U/mL,是迄今所见报道中发酵液壳聚糖酶活力最高的微生物菌株.该壳聚糖酶是一种诱导型的胞外酶,采用20-70﹪(NH<,4>)<,2>SO<,4>分级盐析、Sephadex G-75凝胶过滤、Q-Qepharose Fast Flow阴离子交换层析对菌株YJO2发酵液中的壳聚糖酶进行分离提纯,获得了SDS-PAGE呈单条带的壳聚糖酶,分子量为66kD.对该酶进行部分酶学性质的研究表明该壳聚糖酶的最适作用温度和最适反应pH分别为50℃和pH5.6,酶活力在pH4.0-9.0范围内和50℃以下时相对稳定;金属离子Mn<'2+>对酶活力有明显的促进作用,Cu<'2+>、Fe<'3+>和Hg<'2+>则对酶活力具有明显的抑制作用;最适作用底物为60-93﹪脱乙酰度的壳聚糖;除了能降解壳聚糖,对胶体甲壳质也表现一定的水解活性,但不能降解羧甲基纤维素.采用该壳聚糖酶对壳聚糖进行酶解制备壳寡糖试验,获得了水溶性良好的降解产物,经HPLC分析降解产物的数均分子量为3000Da左右.

关键词：壳聚糖;壳聚糖酶;发酵条件;降解;壳寡糖

授予单位：中国海洋大学

授予学位：硕士

学科专业：海洋生物

导师姓名：韩宝芹

学位年度：2004

语种：中文

分类号：O636;Q178.53

页数：82

在线出版日期：2005-05-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）