对虾白斑综合症病毒受体阻断剂的初步筛选
对虾白斑综合症病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)自92年以来养殖一类宿主广且毒力强的对虾病原,给海水养殖业带巨大的经济损失.十几年来,各研究者从其组织病理学、免疫学、基因组学及蛋白质组学等深入分子生物学水平的研究,对该病原有了很深了解.然而有关其抗病毒药物的研究至今未见有报道.该论文建立了96孔板上建立了对虾鳃膜受体蛋白和WSSV的特异结合模型,研究了二者结合的量比关系,及包被蛋白的最适量;还研究了TxitionX-100、SDS及NP40等表面活性剂对结合活性的影响,发现TxitionX-100和NP40可提高结合活性,而SDS则会使结合活性降低.通过该研究,改进了96孔板上病毒和鳃膜受体蛋白特异结合的技术.研究了一些多糖对WSSV受体的阻断作用,筛选得到的三种多糖对WSSV的受体结合有很强的抑制作用.包被对虾鳃膜受体蛋白,使受体结合与固相载体上,然后加入多糖H处理过的地高辛标记的WSSV,实验结果发现,多糖H处理过的WSSV结合活性有很明显的降低;把WSSV包被于固相载体上,加入分别用多糖A及多糖P处理过的地高辛标记的对虾鳃膜受体蛋白,结果显示,二者对鳃膜受体蛋白结合活性也有很明显的抑制作用.进行了多糖H对健康虾的抑制感染研究,结果表明多糖H对WSSV的感染有一定程度的抑制作用.揭示了多糖抗WSSV感染的可行性.通过毕赤酵母表达系统成功表达了WSSV的两个粘附蛋白VP281及VP292,96孔板上分析其结合活性,结果显示VP281有很强的结合活性,提示了酵母表达的VP281能保持其原有的生物活性;分别研究VP292、VP281及其阳离子交换层析柱得到纯化样品对WSSV的受体阻断作用,发现都有很强的抑制效果,进一步说明二者特别是VP281在WSSV侵染过程中的重要性.阐明了VP281是WSSV的一个关键性粘附蛋白,同时也揭示了抗病毒策略的另一条途径是酵母表达产物的应用.
WSSV;病毒受体;病毒吸附蛋白;阻断剂;多糖;酵母表达产物
中国海洋大学
硕士
渔业资源
黄倢;李赟
2004
中文
S945.4
80
2005-05-24(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)