酵母双杂交系统用于对虾白斑综合症病毒(WSSV)受体基因的筛选
对虾白斑综合症病毒(WSSV)是对虾暴发性流行病的主要病原,严重危害对虾养殖业.病毒入侵宿主首先要和其对应的特异受体结构,深入了解WSSV感染机制,找到编码受体的基因,无疑对病害的防治具有基础性意义.该实验利用酵母双杂技术进行了受体筛选的初步研究工作.作者利用SMART(Switching Mechanism at 5' end of RNA Transcript)技术,以同源重组的方式构建了中国明对虾鳃细胞的全长cDNA文库.首先用RNA提取试剂盒从中国明对虾鳃细胞中提取总RNA,以总RNA为模板,CDS Ⅲ oligo(dT)为引物,反应一段时间后,再加入转换模板(switching template),继续反应,反转录合成cDNA第一链.再在DNA聚合酶下,通过长距离PCR,扩增双链DNA.双链cDNA经凝胶过滤柱纯化后,与线性化的pGADT7-Rec质粒载体同源重组,转化感受态AH109酵母菌株后,得到中国明对虾鳃细胞的全长cDNA文库.经测量该文库的容量为2.1×10<'6>,扩增后文库的滴度为7.3×10<'7>cfu/ml,菌落PCR测定,该文库的重组率为90﹪,可用于下一步的筛选研究.
WSSV;受体基因;中国明对虾;鳃细胞;全长cDNA文库;酵母双杂交;VP28;VP281
中国海洋大学
硕士
渔业资源
黄倢;高天翔
2004
中文
S945.4
80
2005-05-24(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)