角膜内皮细胞体外培养的研究

贺君

中国海洋大学

摘要：

角膜内皮细胞形态学上的完整和功能上的健全是临床上评价角膜功能的指标,也是角膜保存质量评定的标准.观察药物及一些因素对角膜内皮细胞活性的影响离不开角膜内皮细胞的体外试验,而体外试验的成功也依赖于良好的角膜内皮细胞培养.角膜内皮盲是角膜病的一种常见病,角膜内皮细胞的体外培养对于角膜生物学、病理学、药理学以及角膜移植的研究具有重要的意义,也是体外构建组织工程化人工角膜的重要研究内容之一.该论文通过对角膜内皮细胞体外原代培养和传代培养的方法进行筛选和优化,确定角膜内皮细胞原代培养的方法;揭膜培养法:角膜缘内1mm揭取角膜内皮细胞层,贴于瓶底,使其贴壁生长,可以获得六角形单层内皮细胞.不使用Trypsin,避免酶对内皮细胞的损伤.不需较多材料.消化培养法:材料较多时,采用消化培养法,培养中需控制Trypsin的消化时间和浓度;接种细胞易贴壁.组织块培养法:角膜材料较少,采用组织贴片培养法,方法简便易行,细胞时间和浓度;接种细胞易贴壁.组织块培养法:角膜材料较少,采用组织贴片培养法,方法简便易行,细胞迁出和生长速度较快,避免了Trypsin对细胞的损伤,细胞生长形态正常.通过研究,确定了角膜内皮细胞最适培养液为DMEM/F12(1:1).实验结果表明其生长效果较好.角膜内皮细胞传代培养方法:从酶的浓度、酶的用量、酶作用的时间、洗涤离心等方面进行了研究,得到了适合角膜内皮细胞的传代方法.首次进行了促进角膜内皮细胞生长的海洋生物提取物的筛选研究,以解决内皮细胞生长缓慢,传代困难的问题.角膜内皮细胞在多糖生物膜材料上培养实验结果表明:角膜内皮细胞在631S多糖生物膜上贴附和生长情况良好,表明内皮细胞与631S多糖生物膜有良好的生物相容性.角膜内皮细胞冷冻保存实验结果表明:甘油作为角膜内皮细胞的保护液进行深冷冻保存的效果较好,在15﹪的甘油保护液中保存,细胞复苏成活率较高,细胞形态正常.

关键词：角膜内皮细胞;培养;海洋生物提取物;多糖生物膜;细胞保存

授予单位：中国海洋大学

授予学位：博士

学科专业：海洋生物学

导师姓名：刘万顺

学位年度：2004

语种：中文

分类号：R318.18;Q2-33

页数：81

在线出版日期：2005-05-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）