Ⅰ.PPARγ与小分子以及相关受体蛋白的相互作用研究 Ⅱ.SARS冠状病毒刺突蛋白免疫片段的热力学和动力学研究
该博士论文是由两个独立的研究课题组成:ⅠPPARγ与小分子以及相关受体蛋白的相互作用研究 PPAR是一类与脂肪和糖类代谢密切相关的核受体,它与配体以及别的核受体作用能够有效地调控下游基因的表达,而影响人的各种生理作用.目前对于受体与配体以及受体蛋白之间相互作用的研究相对较少,并缺乏定量的研究数据.该论文旨在从分子水平上对PPAR与小分子以及相关受体蛋白的相互作用研究进行方法学的讨论.我们首次通过表面等离子共振技术、圆二色谱以及分子对接模拟等方法研究了一系列PPARγ配体与PPARγ配体结合部位的相互作用.表面等离子共振生物传感器实验确定了这些配体与受体PPARγ作用时的解离平衡常数与有文献报道的数据吻合;同时我们发现当PPARγ结合配体后可以诱导其自身构象的变化,并表现在二级结构的热稳定上,因此通过圆二色谱观察PPARγ结合配体后的热稳定性,利用热稳定性参数与解离平衡常数之间的线性相关性就可以获得与配体结合的信息,这种首次报道的方法为研究配体受体相互作用提供了一条更为新颖的思路;分子对接模拟进一步在分子水平上对配体与受体相互作用的模型做了讨论,并且对不同配体与受体的作用的结合强度差异在结构水平上进行了解释,其结果与上述的两种实验方法具有极好的相关性.Ⅱ.SARS冠状病毒刺突蛋白免疫片段的热力学和动力学研究 严重急性呼吸综合症(Severe Acute Respiratory Syndrome,SARS)是一种严重的呼吸道疾病,SARS冠状病毒被确诊为该疾病的元凶,SARS冠状病毒的刺突蛋白做为病毒的外层包被蛋白对于病毒进攻人体细胞具有非常重要的作用.该论文中,对SARS冠状病毒刺突蛋白的免疫片段S1b(Ala<'251>-His<'641>)进行了表达纯化以及生化性质的讨论,为研究SARS刺突蛋白的结构和功能特性提供更多的信息.含有该片段基因整合在pET32c载体中在大肠杆菌中获得充分高表达,带有His等标签的融合蛋白利用柱上酶切法和分子筛层析进行了纯化.纯化后的Slb蛋白通过圆二色性(CD)、色氨酸荧光分析和停流CD光谱分析等方法研究了其热力学和动力学特性.荧光实验发现该片段在热变性过程中表面活化能为16.3±0.2Kcal·mol<'-1>,而热变性转化温度(T<,m>)为52.5±0.4℃;圆二色性实验发现热变性过程中没有二级结构的变化,说明该片段的二级结构骨架具有相对的热稳定性.盐酸胍作为变性剂对于Slb影响较大,CD和荧光实验均证实盐酸胍变性浓度(C<,m>)约为2.38M.停流实验分别监测了该蛋白片段的盐酸胍化学变性和复性过程,并首次利用动力学实验得到的驰豫时间(τ)计算了变性浓度C<,m>,这成为了研究稳态和动态两种形式下蛋白变性过程的纽带.
核受体;配体小分子;蛋白相互作用;冠状病毒;刺突蛋白免疫片段
中国海洋大学
博士
海洋生物学
戴继勋;沈旭
2004
中文
R373.1;Q591.2
135
2005-05-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）