双向氢化酶基因的克隆、分析及其在节旋藻和螺旋藻分子系统学中的应用

张晓辉

中国海洋大学

摘要：

根据GenBank中报道的蓝藻双向氢化酶基因序列设计引物,用PCR和染色体步移法得到了节旋藻双向氢化酶的基因全序列.在得到双向氢化酶基因群中发现两段具有启动子功能的序列,分别位于hoxE基因的上游,hoxF和hoxU基因的间隔区.将推测的启动子序列和启动子探测载体pEGFP-1进行重组,用热激转化法和自然转化法分别对大肠杆菌JM109和集胞藻Synechococcus sp PCC6803进行转化,并在两种受体细胞中均检测到了绿色荧光蛋白的表达,证明所得到的序列具有启动子功能.通过Southern杂交证明在节旋藻FACHB341基因组中hoxH是单拷贝基因,通过RT-PCR方法验证了hoxH和hoxY在节旋藻FACHB341中的表达,节旋藻FACHB341中hoxH和hoxY是在非固氮蓝藻中典型的[NiFe]氢化酶基因.在节旋藻和螺旋藻分子系统学研究中,克隆了节旋藻和螺旋藻的[NiFe]氢化酶大小亚基基因hoxH和hoxY,并进行序列测定和分子系统学分析.从节旋藻属5个品系和螺旋藻属1个品系中克隆了hoxY基因的部分序列.序列长度都是479bp,在节旋藻中该基因核酸序列GC含量为46.0﹪到46.6﹪,螺旋藻中是43.5﹪.通过比较相应的核苷酸序列构建了系统树,表明螺旋藻和节旋藻属处于不同的进化分枝.

关键词：节旋藻;螺旋藻;双向氢化酶;序列分析;启动子检测;系统发生分析

授予单位：中国海洋大学

授予学位：博士

学科专业：海洋生物学

导师姓名：张学成

学位年度：2004

语种：中文

分类号：Q949.205;Q785

页数：141

在线出版日期：2005-05-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）