褐藻胶裂合酶工程化研究与应用

胡晓珂

中国海洋大学

摘要：

该论文以褐藻胶裂合酶的工程化为目的,利用一株具有自主知识产权的褐藻胶裂合酶高产菌株Vibrio sp.510-64为生产菌株,进行基本酶学性质和酶蛋白结构分析,确定其发酵和产酵工艺参数,为褐藻胶裂合酶制剂的工业化生产提供了充分的理论依据和实践基础.论文以从海洋环境中筛选到的一株具有褐藻胶裂合酶活性的菌株Vibrio sp.510为出发菌株,进行复合诱变和选育,获得了一株酶活力显著提高、生物学性状稳定的突变株Vibrio sp.510-64,其发酵液产酶活力从136.4EU/ml提高到了289.EU/ml(紫外法测酶活).实验确定Vibrio sp.510-64菌株的最佳产酶培养基为:AlgNa 5‰,NaCl 20‰,CaCl<,2> 0.1‰,KH<,2>PO<,4> 1‰,NH<,4>Cl 3‰,pH值为6.经过68代传代实验,未发现有菌种退化现象.液体发酵制备出褐藻胶裂合酶液,通过硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析和两步Superdex 75凝胶过滤技术对褐藻胶裂合酶进行纯化和精制,SDS-PAGE确定此褐藻胶裂合酶的分子量为34.6kDa,采用Edman降解法测得此酶的N端氨基酸序列为AEILATDDAT,与已有的褐藻胶裂合酶N端不同,初步确定为新酶.中试试验最终确定了发酵控制参数,显示Vibrio sp.510-64是一株发酵周期短、产酶性能稳定、发酵条件易于控制、成本低廉的优良菌种,适合工业化生产.

关键词：褐藻胶裂合酶;弧菌属;褐藻寡糖;酶法制备;抗肿瘤;促种子萌发;原生质体;中试试验

授予单位：中国海洋大学

授予学位：博士

学科专业：水产品加工与贮藏工程

导师姓名：管华诗;江晓路

学位年度：2004

语种：中文

分类号：Q814

页数：153

在线出版日期：2005-05-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）