WSSV感染中国对虾血细胞及其在血细胞膜上结合蛋白的研究

姜有声

中国海洋大学

摘要：

选用2×L-15作为基本培养基,添加20﹪的FBS及其他成份,NaCl调节渗透压,pH7.2～7.4,29℃恒温,原代培养中国对虾血细胞,倒置相差显微镜观察可活20d左右.用白斑综合症病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)梯度稀释液感染培养血细胞,相差显微镜观察细胞死亡状况.离心收集WSSV感染的完整的血细胞,细胞免疫组化法(immunocytochemistry, ICC)检测被感染血细胞内的WSSV,结果阳性明显.酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测表明,WSSV在中国对虾血细胞内随时间和WSSV的浓度的不同而增殖的幅度较小.以冰浴研磨,冷冻离心的方法提取中国对虾的血细胞膜,电镜下可见膜两边向中间卷曲的形状,将中国对虾的全血细胞与其血细胞膜做聚丙烯酰胺凝胶电泳(sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE),比较二者蛋白质的差别.用病毒结合膜蛋白印迹技术(virus overlay-protein binding assay, VOPBA)检测中国对虾血细胞膜上的WSSV结合蛋白,结果呈现三条阳性蛋白带,分子量分别为83.0、74.0、69.9KDa,对照全血细胞与血细胞膜的凝胶电泳结果可知,血细胞膜上有两条结合蛋白,分子量分别为74.0、69.9KDa.这三条结合蛋白的特征和作用还需做进一步研究.另外,还做了中国对虾、日本对虾、南美白对虾、虾蛄、三疣梭子蟹等5种对WSSV敏感水产动物的全血细胞电泳,比较他们的蛋白差别,为找出其细胞膜上的共同受体打下基础.

关键词：中国对虾;血细胞;原代培养;WSSV;结合蛋白

授予单位：中国海洋大学

授予学位：硕士

学科专业：水产养殖

导师姓名：战文斌

学位年度：2003

语种：中文

分类号：S945.4

页数：48

在线出版日期：2004-04-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）