牙鲆多聚免疫球蛋白受体与黏膜免疫球蛋白免疫应答动态分析
黏膜免疫系统作为免疫防御的第一道防线，能够参与保护机体免受病原体的侵害。黏膜免疫系统以分泌型免疫球蛋白(sIgs)为主要的防御因子。多聚免疫球蛋白受体(polymeric immunoglobulin receptor，pIgR)是黏膜免疫中的重要组成成分，其特异性地转运sIgs通过上皮细胞保护机体。因此pIgR的有效分泌是多聚免疫球蛋白发挥黏膜防御功能的必要条件，在黏膜免疫中起着举足轻重的作用。目前对硬骨鱼类pIgR的研究已经日渐活跃，而pIgR与sIgs的免疫应答动态也备受关注。 本文利用灭活鳗弧菌（Vibrio anguillarum）通过注射和浸泡两种方式免疫牙鲆（Paralichthys olivaceus），测定了免疫后牙鲆组织中pIgR与IgM基因水平的表达变化，并检测了免疫后牙鲆皮肤黏液、鳃黏液、肠黏液及胆汁中pIgR及IgM蛋白水平的表达变化，研究了血清、胆汁及三种黏液中的pIgR-IgM复合物，最后定位pIgR及IgM在牙鲆黏膜免疫相关组织中的分布，为进一步研究硬骨鱼类黏膜免疫机制奠定了基础。本文具体研究结果如下: 用灭活鳗弧菌采用注射和浸泡两种方式对牙鲆进行免疫，利用实时荧光定量PCR法对免疫后牙鲆各组织中pIgR及IgM基因水平表达变化进行了测定。结果表明，免疫后的牙鲆各组织中pIgR基因的表达变化趋势与IgM基本一致，都呈现先上调后下调的趋势，然而pIgR基因水平上升比IgM快，到达峰值的时间也比IgM早。在皮肤、鳃和后肠中，浸泡组pIgR的峰值高于注射组，而在其余组织中，则低于注射组;在皮肤和鳃中，浸泡组IgM的峰值高于注射组，而在其余组织中，则低于注射组。 利用ELISA法对鳗弧菌免疫后牙鲆pIgR及IgM蛋白水平的表达变化进行检测。结果表明，各免疫组中pIgR与IgM的蛋白水平变化趋势基本一致，在一段时间之内均呈现先上升后下降的趋势，然而pIgR蛋白水平上升比IgM快，到达峰值的时间也比IgM早。在皮肤黏液和肠黏液中，浸泡组pIgR的峰值较注射组高，而在鳃黏液和胆汁中，其峰值较注射组低;在皮肤黏液和鳃黏液中，浸泡组IgM的峰值较注射组高，而在肠黏液和胆汁中，其峰值较注射组低。 将牙鲆血清、皮肤黏液、鳃黏液、肠黏液及胆汁在非变性电泳条件下进行Western blot实验。结果显示，抗牙鲆血清IgM单抗2D8和抗牙鲆皮肤黏液单抗1A2与牙鲆血清、皮肤黏液、鳃黏液、肠黏液及胆汁均反应，均在分子量约800kD处出现单一条带;抗牙鲆pIgR多抗与牙鲆皮肤黏液、鳃黏液、肠黏液及胆汁均在约800kDa处发生特异性反应，而与血清无特异性反应。 利用抗牙鲆pIgR多抗及抗牙鲆IgM单抗2D8对牙鲆黏膜免疫相关组织皮肤、鳃、后肠及肝脏进行免疫组织化学染色。结果显示，两种抗体的染色结果大体一致，在四种组织中均出现了明显的红色阳性信号，而对照组中均未观察到阳性信号。pIgR阳性信号主要位于皮肤、鳃和后肠上皮细胞和黏液细胞及其表面，鳃和后肠上皮细胞及其基部，以及肝管壁上皮细胞。IgM阳性信号主要位于皮肤、鳃和后肠上皮细胞和黏液细胞，后肠上皮下固有层，肝管壁上皮细胞中。
牙鲆;多聚免疫球蛋白受体;黏膜免疫球蛋白;免疫应答
中国海洋大学
硕士
水产养殖
绳秀珍
2015
中文
Q959.486
70
2016-03-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）