基于磺基水杨酸的水产品氟喹诺酮类药物酶联免疫检测前处理技术研究
免疫分析法是以抗原与抗体的特异性、可逆性结合反应为基础的新型分析技术。然而，免疫检测的大多前处理过程与常规大型仪器相同，有机溶剂提取，SPE、LLE或LPE净化，不能更好的体现免疫检测的快捷性;而仅仅采取简单的提取，可能会造成假阳性或假阴性的结果，大大降低免疫检测的灵敏度及可靠性，这主要是由于基质对免疫分析的干扰。因此，本论文旨在建立既能消除基质影响又简便快速的样品前处理方法，从而最大限度地实现现场快速检测的目的。 本论文首先以三种鲆鲽鱼（大菱鲆、牙鲆、舌鳎）为主要研究对象，研究探讨了加热，有机溶剂等对水产品药物检测中的主要基质蛋白质的去除效果及基质效应性，发现仅仅靠加热并不能有效的去除蛋白基质的影响，有机溶剂能有效的去除蛋白基质的影响，但对免疫检测有着较大影响，需通过加热、旋蒸等方法去除，这同时也增加了样品前处理的复杂性。 通过免疫印迹及SDS-PAGE等方法探究了不同种类和浓度的酸对鱼肉蛋白基质的去除效果，结合其对免疫分析的影响，发现低浓度的磺基水杨酸既可消除蛋白基质的影响又对检测影响较小。在此基础上，对提取剂浓度、pH值等条件进行优化，建立了简便快速的氟喹诺酮类药物样品前处理方法并进行了方法检测限、精密度和准确度的测定，此外，还与常规样品前处理方法进行了比较，结果表明，检测限为0.1μg/L，工作曲线是0.1-25.6μg/L，对三种鲆鲽鱼中氟喹诺酮类药物残留进行检测，鱼肉样品经过2％磺基水杨酸提取后即可消除基质效应，回收率为68％～94％，变异系数小于20％，与常规前处理方法相比，所建方法不需要净化过程，前处理时间与传统前处理方法的45～60min相比，仅需20～30min，且不需要有机溶剂和特殊仪器。 在新建样品前处理方法的基础上，进一步将此前处理方法应用于不同来源的鱼虾上，发现虽然不同来源的鱼虾蛋白质组分不同，但2％磺基水杨酸均能消除蛋白质基质影响，鱼虾样品基质曲线与标准曲线的吻合度较好，回收率在65～95％之间，变异系数小于20％，说明此样品前处理方法对水产品均能应用。通过高效液相色谱检测方法，对建立的氟喹诺酮类药物检测方法进行数据确证，两种方法的检测结果一致性很高，线性相关系数R2值在0.97以上，表明本方法可应用于水产品中氟喹诺酮类药物快速定性及定量分析。 本研究简化和优化了酶联免疫检测水产品中氟喹诺酮类药物的新型样品前处理方法，首次使用磺基水杨酸作为样品前处理方法的提取剂，样品经过提取后即可消除基质效应，不需要净化步骤即可检测，是有效简便的基质效应消除方法和快速简便的样品前处理方法，更好体现免疫检测的优势。
水产品;氟喹诺酮类药物;酶联免疫检测技术;磺基水杨酸
中国海洋大学
硕士
食品科学
曹立民
2015
中文
TS254.7
78
2016-03-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）