两株潜在益生菌安全性评价及其对凡纳滨对虾生长、免疫相关酶活力、抗WSSV能力的影响
近年来，对虾养殖业疾病频发，已成为水产养殖业健康发展的瓶颈。抗生素被禁止使用之后，人们迫切需要有效的技术手段以增强对虾免疫机能从而提高对虾抗病力。益生菌具有改善养殖环境、促进对虾生长、增强对虾免疫机能等作用，在对虾养殖中被广泛应用。本研究以实验室筛选获得的两株潜在益生菌（芽孢杆菌BZ5株和溶藻弧菌VZ5株）为研究对象，探讨其在生产应用中的安全性及其对凡纳滨对虾生长、免疫相关酶活力、抗WSSV能力的影响，以期为益生菌在对虾养殖中的开发及应用提供理论基础和技术支持。本研究主要研究内容包括:1.通过溶血实验、药敏实验、注射感染实验和浸泡感染实验探讨这两株菌对养殖环境及对虾的安全性问题;2.水体中添加不同浓度芽孢杆菌BZ5株和溶藻弧菌VZ5株对对虾生长、消化酶活力、免疫相关酶活力和抗WSSV能力的影响，从而得出芽孢杆菌和溶藻弧菌影响凡纳滨对虾相关酶活的最佳浓度;3.注射和浸泡相同浓度下的芽孢杆菌BZ5株和溶藻弧菌VZ5株对对虾消化酶活力、免疫相关酶活力和抗WSSV能力的影响。本研究主要研究结果如下: 1.通过溶血实验和药敏实验发现，芽孢杆菌BZ5株和溶藻弧菌VZ5株都不产生溶血现象;芽孢杆菌BZ5株对头孢氨苄、头孢唑啉、头孢拉定等14种抗生素敏感，溶藻弧菌VZ5株对新霉素、红霉素等4种抗生素敏感，对哌拉西林、头孢氨苄、头孢唑啉等8种抗生素中度敏感，因此确定两株菌株在环境中使用安全;通过注射感染实验和浸泡实验发现，芽孢杆菌BZ5株和溶藻弧菌VZ5株在106cfu/mL浓度下对凡纳滨对虾无明显的毒害作用。 2.通过不同浓度芽孢杆菌BZ5株和溶藻弧菌VZ5株浸泡实验发现:(1)水体中的芽孢杆菌BZ5株（密度为104cfu/mL）能够更好地提高凡纳滨对虾的生长和存活率，对虾终末体重和成活率分别达到（9.00g±0.36g）和（86.11℃±6.80℃），比对照组分别提高70.45℃和19.23℃。水体中的溶藻弧菌VZ5株（密度为104cfu/mL）能够更好地促进对虾生长，对虾终末体重达到（6.69g±0.21 g），比对照组增加26.70℃;水体中的溶藻弧菌VZ5株（密度为108cfu/mL）能够更好地提高对虾的存活率（91.67℃±9.13℃），比对照组提高26.93℃;(2)104cfu/mLBZ5组、106cfu/mL BZ5组、104cfu/mL VZ5组、106cfu/mL VZ5组和108cfu/mL VZ5组对虾的胰蛋白酶、淀粉酶活力显著高于对照组(P＜0.05)。总体上，水体中的芽孢杆菌BZ5株（密度为106cfu/mL）和溶藻弧菌VZ5株（密度为106cfu/mL）提高凡纳滨对虾消化酶的活力效果明显;(3)104cfu/mL BZ5组、106cfu/mL BZ5组、104cfu/mL VZ5组、106cfu/mL VZ5组和108cfu/mL VZ5组对虾的SOD、POD、抗菌酶、PO活力整体上显著高于对照组(P＜0.05)。总体上讲，水体中的芽孢杆菌BZ5株（密度为106cfu/mL）和溶藻弧菌VZ5株（密度为106cfu/mL）提高凡纳滨对虾免疫相关酶活力效果明显;(4) WSSV感染后，104cfu/mL BZ5组、106cfu/mL VZ5组和108cfu/mL VZ5组对虾半数致死时间(LT50)分别比对照组延长29.49％、15.39℃、1.28℃，而106cfu/mL BZ5组在168h时的累计死亡率为45.45℃。实验表明，水体中的芽孢杆菌BZ5株（密度为106cfu/mL）和溶藻弧菌VZ5株（密度为106c fu/mL）可以不同程度的提高凡纳滨对虾抗WSSV能力。 13.通过注射和浸泡相同浓度的芽孢杆菌BZ5株和溶藻弧菌VZ5株发现:(1)芽孢杆菌组和溶藻弧菌组对虾的胰蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶活力整体上显著高于对照组（P＜0.05），芽孢杆菌组对虾的胰蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶活力整体上高于溶藻弧菌组;(2)芽孢杆菌组和溶藻弧菌组对虾的SOD、POD活力整体上显著高于对照组(P＜0.05)，芽孢杆菌组对虾的SOD、POD活力整体上高于溶藻弧菌组;(3)感染WSSV后，凡纳滨对虾的半数致死时间(LT50):哈维氏弧菌组＜空白组＜溶藻弧菌组＜芽孢杆菌组。注射芽孢杆菌组和溶藻弧菌组的半数致死时间分别比对照组延长了27.38℃和21.43℃。浸泡芽孢杆菌组和溶藻弧菌组半数致死时间分别比对照组延长了24.73℃和8.60℃。实验表明，注射芽孢杆菌BZ5株和溶藻弧菌VZ5株可以更好的提高凡纳滨对虾消化酶活力、免疫相关酶活力及抗WSSV能力，其中，芽孢杆菌BZ5株提高效果更加明显。
对虾;益生菌;安全性评价;生长发育;免疫酶活性;抗白斑综合征病毒能力
中国海洋大学
硕士
渔业
马甡
2015
中文
S968.226.3
74
2016-03-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）