山东地区海水养殖区抗生素耐药基因多样性分布研究及抗生素耐药基因芯片检测技术研究和开发
本研究针对山东海水养殖区海水养殖环境，对养殖水体中多样化的抗生素耐药菌及耐药基因定性及定量分布进行研究，并根据耐药基因在水样中的多样性分布信息研究开发了适用于山东省海水养殖区耐药基因检测的基因芯片检测方法，并用该方法对山东地区海水养殖区的4个水样进行了检测并验证了结果。主要内容包括以下3个方面。 针对山东近海养殖环境中的溶血菌，本研究对其抗生素耐药性及所携带耐药基因进行了检测分析。用血琼脂培养基筛选分离到158株具有溶血活性的细菌菌株，对分离菌株对常用抗生素敏感性进行测定，结果表明分离到的溶血菌菌株中四环素类和磺胺类抗生素耐药菌所占比例最大，达到49.4％;相应耐药菌中四环素耐药基因tetA、tetB、tetM和磺胺类耐药基因sul1、sul2均被检出;另外对多重耐药菌中整合子类型的检测结果表明多重耐药菌携带的整合子类型为Ⅰ类整合子。 对山东地区海水养殖海域常见抗生素耐药菌及耐药基因分布进行调查，结果表明所调查5个海水养殖区水样中四环素类、磺胺类、β-内酰胺类耐药菌比例显著高于氯霉素类和喹诺酮类耐药菌;此外用RT-PCR方法对共计15种耐药基因在水样中的丰度测定表明磺胺类（sul、dfra/16S rRNA=10-6-10-2）、喹诺酮类（qnr/16S rRNA=10-6-10-2）以及四环素类耐药基因(tet/16SrRNA=10-5-10-2)在各水样中丰度差异不显著，而氯霉素耐药基因（cata、cmle/16SrRNA=10-8-10-2）在不同水样中丰度差异显著，且cata1和cmle1丰度与可培养氯霉素耐药菌比例存在相关线性关系。实验数据说明山东海水养殖区水样中存在一定的抗生素耐药菌和耐药基因污染。 通过对山东地区海水养殖区35个水样中常见的抗生素耐药菌及其相关基因进行检出鉴定获得了33种抗生素耐药及其相关基因，根据耐药性基因的多样性分布和基因序列等信息设计了针对每个耐药基因的核酸杂交探针，通过对探针迸行特异性筛选及验证并在优化好的反应条件下构建最佳实验方案，并对比PCR方法对实际样本进行检测来评价芯片检测方法的灵敏性和准确性，初步建立了海水养殖环境中抗生素耐药基因基因芯片检测方法。该技术可以以简便快速的鉴定出山东海水养殖区抗生素耐药基因分布信息，为细菌传染病用药指导提供依据。
海水养殖环境;抗生素耐药菌;耐药基因;分布规律;基因芯片检测技术
中国海洋大学
硕士
发育生物学
张士璀
2015
中文
S917.1
79
2016-03-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）