Beagle犬血清中HS203的微量分析及初步药代动力学研究
寡聚藻甘酸铬钠(HS203)是一种以抑制胰岛淀粉样蛋白(IAPP)沉积为作用靶点,具有明显改善胰岛素抵抗作用的海洋寡糖化合物,有望开发成为一种新型的海洋抗2型糖尿病药物。由于缺乏一种灵敏有效的微量分析方法,特别是适合于生物体内微量样品分析检测的方法,HS203的药代动力学研究一直未取得突破性进展。本论文分别采用柱前紫外衍生高效液相色谱、柱前荧光衍生高效液相色谱和柱后荧光衍生高效液相色谱三种策略对HS203的微量分析方法进行了系统的研究,并成功测定了Beagle犬血清中HS203静脉注射的药时曲线和药代动力学参数。 通过PMP紫外柱前衍生高效液相色谱法的分析,确定了HS203的最适降解条件为温度为110℃,时间4 h,TFA浓度为2 mol/L;确定了以0.1 mol/L磷酸盐缓冲液(Ph6.7):乙腈(83:17,V/V)为流动相,在Eclipse XDB-C18色谱柱上进行分离,降解后的HS203与内源性干扰物质能够达到较好的分离效果。将此方法成功地用于Beagle犬静脉注射60 mg/kgHS203的药代动力学分析,并计算了各药代动力学参数,结果表明其药时曲线符合二房室开放模型。 通过α-萘胺荧光柱前衍生高效液相色谱法的分析,确定了HS203水解为单糖后,在甲醇/冰乙酸=9:1体系中与2 mol/Lα-萘胺和1.2 mol/L氰基硼氢化钠进行衍生反应可得到较好的荧光标记效果,采用乙酸乙酯萃取3次后再进行氮吹可有效去除剩余标记试剂;Ex=291 nm,Em=440 nm为最佳波长。确定了超滤离心方法为去除血清蛋白的方法,采用0.1 mol/L磷酸盐缓冲液(Ph6.7)-乙腈(83:17,V/V)为流动相时,降解后的HS203、内标GalA及血清中的Glc分离度较好,为HS203及其他海洋类寡糖药物的分析奠定了基础。 通过盐酸胍荧光柱后衍生高效液相色谱法的分析,确定了柱后最佳衍生条件为:200 mmol/L盐酸胍、0.5:mol/L氢氧化钠及125℃的衍生温度;采用50 mmol/L磷酸盐缓冲液(Ph6.7)-乙腈(83:17,V/V)为流动相,在Shodex AsahipakGS-320 HQ色谱柱上进行分离,HS203原型、内标GlcA及内源性干扰物质能够达到很好的分离;以0.25 mol/L NaCl溶液进行超滤离心分离,可有效去除内源性杂质的干扰和提高HS203的回收率。该法成功地用于HS203血药浓度分析及初步药代动力学研究,确定了该药的药代动力学符合二房室开放模型,与紫外衍生液相分析方法结果相符。该方法灵敏度高、样品用量少、重现性和准确度较好,操作简单,检测限可达0.2μg/Ml,高于HS203的聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)银染检测方法。 本论文在对Beagle犬血清中HS203的微量分析方法进行研究的基础上,分别建立了一种将HS203进行降解后再进行PMP衍生的微量分析方法和一种对HS203不经降解,直接进行色谱分离和在线检测的柱后荧光衍生分析方法,并将两种方法成功地应用于Beagle犬中HS203的药代动力学分析。特别是建立的柱后荧光衍生分析方法,不仅具有专属性强、灵敏度高,可以检测HS203原型药物的特点,而且还可以同时检测Beagle犬中血糖浓度的变化,为顺利开展HS203的临床研究奠定了基础,同时也为其它海洋糖类药物的研究与开发提供了参考。
寡聚藻甘酸铬钠;胰岛素抵抗;药代动力学;微量分析;柱前荧光衍生高效液相色谱;柱后荧光衍生高效液相色谱;紫外衍生高效液相色谱
中国海洋大学
硕士
药物化学
赵峡
2012
中文
R282.77;R969.1
92
2012-12-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）