Vasa、卵泡抑素(FST)和抗缪勒氏管激素(AMH)在半滑舌鳎繁殖周期中的作用研究
半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis Günther)是我国近海的大型名贵经济鱼类。本研究利用分子生物学和mRNA原位杂交技术,分析了Vasa、卵泡抑素(follistatin,FST)、抗缪勒氏管激素(anti-mullerian hormone,AMH)在半滑舌鳎繁殖周期中的功能,所得结果与结论如下: 1.半滑舌鳎Vasa基因的克隆和表达 本研究克隆了半滑舌鳎Vasa基因的cDNA序列,其全长2602bp,编码包含722个氨基酸残基的蛋白质,有一个经选择性剪切形成的亚型。推导的氨基酸序列含有DEAD-box家族特有的8个保守,N末端含有5个RGG重复和10个RG重复。组织表达分析表明,Vasa基因在性腺中表达量丰富,性腺外组织仅在心脏中有微量表达。 利用RT-PCR和mRNA原位杂交技术研究了csVasa在性成熟半滑舌鳎繁殖周期的表达模式。在卵巢中,Vasa的表达量在初级卵黄期和囊泡期要显著高于核周期和退化吸收期;精巢中,Vasa在精子细胞增殖期的表达量要明显高于精母细胞增殖期和精子成熟期。这些结果表明,Vasa可能在半滑舌鳎的配子发生中起重要作用。初级卵黄期卵巢的Vasa mRNA原位杂交结果显示,Vasa mRNA在Ⅲ期卵母细胞的胞质中均匀分布,外周皮层信号强度较高。 2.半滑舌鳎FST基因的克隆和表达 采用RACE技术克隆得到了半滑舌鳎FST的cDNA序列,其全长1455bp,编码包含321个氨基酸残基的蛋白质,属于TGFB家族。组织表达分析表明,FST、在半滑舌鳎13中组织中均有表达,其中在性腺中表达最高,脑和鳃中表达量较高,证明FST具有广泛的生理作用。 利用RT-PCR技术研究了FST在性成熟半滑舌鳎繁殖周期的表达模式。在卵巢中,FST的表达量核周期最高,初级卵黄期和囊泡期较高,推测FST抑制FSH刺激的卵母细胞发育的作用,而对LH无明显作用;精巢中,FST在各个时期均有表达,并且精子细胞增殖期表达量较低,推测这是因为FST对芳香化酶的调节功能所致。 3.半滑舌鳎AMH基因的克隆和表达 采用RT-PCR技术克隆得到了半滑舌鳎AMH的cDNA片段序列,长度955bp,编码318个氨基酸,属于TGFβ家族。组织表达分析表明,AMH在仅半滑舌鳎的性腺中表达,并且在精巢中的表达量要高于卵巢。 利用RT-PCR技术研究了AMH在性成熟半滑舌鳎繁殖周期的表达模式。在卵巢中,AMH在初级卵黄期和囊泡期表达量较高,在退化吸收期最高,推测鱼类的AMH与哺乳类一样具有抑制FSH的作用。研究还发现,在雌性半滑舌鳎繁殖期中,AMH可能具有抑制LHR表达的功能。精巢中,AMH在精母细胞增殖期表达量最高,进入繁殖期后表达量显著下降,与AMH在哺乳动物进入青春期后被睾酮(T)抑制相一致,证明在鱼类中AMH同样被T抑制。此外,AMH具有组织精子发生启动的生理功能。
半滑舌鳎;Vasa卵泡抑素;抗缪勒氏管激素;繁殖周期
中国海洋大学
硕士
水产养殖
温海深
2012
中文
S917.4
84
2012-12-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）