耐冷海洋嗜杀酵母Mrakia frigida嗜杀因子的研究

华明夏

中国海洋大学

摘要：

嗜杀因子(Killer toxin)是许多酵母菌可以产生的一些具有抗微生物活力的外毒素。它们通常是蛋白质或糖蛋白，能够杀死同种或亲缘关系比较近的酵母菌、丝状真菌或细菌。能够产生嗜杀因子的酵母菌称作为嗜杀酵母(Killeryeasts)，它们自己对所产的毒素具有免疫性；被杀死的酵母菌称为敏感菌株。
本论文从南极海泥样品中筛选到一株高嗜杀活性的耐冷菌株2E00797，通过常规鉴定和分子鉴定的方法鉴定为木拉克酵母(Mrakia frigida)，这是在南极海泥样品中分离到的耐冷嗜杀酵母具有强嗜杀活性的首次报道。M.frigida2E00797菌株能杀死梭子蟹致病菌梅奇酵母(Metschnikowia bicuspidata WCY)和人类条件致病菌白色假丝酵母菌(Candida albicans)。
本研究优化的M.frigida2E00797菌株嗜杀因子的最佳发酵条件为：在15°C下，以pH4.5、含NaCl3.0％(w/v)的YPD为培养基培养4 d。发酵液上清经过透析、DEAE-Sephorose Fast Flow阴离子柱交换、超滤浓缩收集液、SephadexTM G-75凝胶过滤最终得到纯化的嗜杀因子，SDS-PAGE显示其分子量约为55.6 kDa。纯化的嗜杀因子在15°C，pH为4.5，含NaCl3.0％(w/v)的嗜杀平板上检测，嗜杀活力最高。经过质谱分析，纯化的嗜杀因子与蛋白激酶的相似性最高，达到35.1％。
对M.frigida2E00797菌株嗜杀因子的嗜杀机理进行初步探究，结果发现嗜杀因子可以杀死完整的敏感酵母WCY，却不能杀死WCY的原生质体，说明嗜杀因子的结合位点存在于敏感酵母的细胞壁；电镜检测发现经嗜杀因子处理过的WCY细胞壁裂解，说明该嗜杀因子能破坏敏感酵母细胞壁的完整；荧光检测发现经嗜杀因子处理过的WCY和C.albicans细胞可以被染料PI染成红色，说明该嗜杀因子能破坏敏感酵母WCY和C.albicans的通透性。

关键词：耐冷酵母菌;嗜杀因子;外毒素;免疫性

授予单位：中国海洋大学

授予学位：硕士

学科专业：微生物学

导师姓名：池振明

学位年度：2012

语种：中文

分类号：Q93

页数：77

在线出版日期：2012-12-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）