红翎菜科三种海藻原生质体分离培养及外植体发育模式研究
红翎菜科海藻是生产卡拉胶的主要原料，被广泛应用于纺织品、食品等方面，此外还具有很高的药用价值、经济价值及重要的生态意义。红翎菜科海藻大部分为野生种，野生资源也日益减少，目前，我国卡拉胶原料藻仍主要依赖于东南亚国家进口，开展红翎菜科海藻苗种繁育技术和遗传改良研究工作已成为我国卡拉胶产业自主发展的急需。
原生质体的分离培养是一类重要的植物细胞工程研究技术。原生质体无细胞壁障碍，是一类重要的生物学研究工具材料，可广泛应用于细胞生物学、体细胞杂交育种、遗传转化以及基因定位等研究。海藻原生质体的分离制备多采用酶法，鉴定常采用荧光增白剂染色法和Evans Blue染色法。本文选取红翎菜科两种生态型的长心卡帕藻(Kappaphycus alvarezii)和麒麟菜(Eucheuma denticulatum)共三种海藻的幼嫩藻体，运用纤维素酶、鲍酶和海螺酶进行酶解，均成功制得原生质体，其中20％鲍酶与12％纤维素酶混合酶制得的原生质体产量达到105个/g以上，分别为(64.20±2.80)×104个/g、(76.80±3.20)×104个/g和(67.80±2.40)×104个/g，显示出纤维素酶与鲍酶这一工具酶组合对原生质体高效制备的良好适用性。在2.0 mol/L葡萄糖渗透剂、30℃黑暗酶解4.0 h的最适酶解条件下，长心卡帕藻原生质体存活率为(49.34±0.12)％。相较于前人研究，本实验结果在酶解效率和产量上均有非常显著的提高。
海藻细胞具有全能性，在适当条件下，细胞、组织均可以分化发育为新个体，这为研究海藻的形态发生、遗传育种及生活史控制等问题开辟了新的途径，并可通过体细胞及组织快繁培育经济海藻苗种。本文对长心卡帕藻(Kappaphycusalvarezii)原生质体进行了再生培养，发现长心卡帕藻原生质体有体细胞团和再生植株两种发育分化途径，并获得原生质体细胞再生苗。在长心卡帕藻酶解后的组织块和外植体再生培养研究中，发现酶解后的组织块出现两种发育途径：一种是酶解后组织块进行了再生新芽的发育，即在培养65 d后长出新生芽，另一种途径是在75 d时观察到形成体细胞团；长心卡帕藻外植体的再生培养过程同样观察到两种途径，即形成纤维状的细胞和致密型的新生幼芽组织，其中有约65％的外植体会再生形成幼芽。
红翎菜科海藻;原生质体;外植体模式;再生发育;分离培养
中国海洋大学
硕士
生物工程
刘涛
2012
中文
Q949.2;Q943
74
2012-12-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）