紫贻贝(Mytilus edulis Linnaeus)多糖的提取分离及结构研究
紫贻贝(Mytilus edulis Linnaeus)俗称海虹,属软体动物门,广泛分布于我国辽宁、山东、浙江等省沿海。紫贻贝资源丰富,肉味鲜美,营养价值高,素有“海洋鸡蛋”之称,并且紫贻贝多糖具有抗凝血、抗肿瘤、免疫功能调节等生物活性。本文以来源于青岛湖岛海域的紫贻贝为原料,采用不同的方法提取得到紫贻贝粗多糖,对它们的基本理化性质进行了较为系统的分析,并采用凝胶渗透和阴离子交换柱层析进行两步纯化,得到了多个具有较高纯度的多糖组分。通过多种化学分析及现代仪器分析技术,确定了60℃热水提取(HW)多糖组分(HWS)的结构,并对酶提(MT)多糖组分(MT0-A1)的结构进行了初步研究。
采用冷水、60℃热水、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶联合酶解提取紫贻贝粗多糖,并对冷水提粗多糖(LT)、HW粗多糖、MT粗多糖进行理化性质分析。PMP柱前衍生高效液相色谱法测得LT和HW单糖组成较简单,主要是葡萄糖(Glc)。MT的单糖组成比较复杂,主要含有Glc、氨基葡萄糖(GlcN)、甘露糖(Man)、氨基半乳糖(GaIN)、半乳糖(Gal)和岩藻糖(Fuc)。
对LT和MT分别采用Q Sepharose4 Fast Flow离子交换柱层析、SepharcrylS300和SephadexTM G-25 Fine凝胶排阻柱层析进一步纯化,得到了LTS1-A1、LTS1-B、LTS2-B1、LTS2-B2、MT0-A1和MT1-B1具有较高纯度的多糖组分,高效凝胶色谱图显示色谱峰单一、对称,重均相对分子质量分别为31.8、40.7、48.1、47.4、3.9和4.8 kD。LTS1-A1的单糖组成较简单,主要由Glc组成;LTS1-B主要含有Man、GlcN、GalN、Glc、Gal和Fuc;LXS2-B1、LXS2-B2、MTO-A1和MT1-B1的单糖组成相似,主要由Man、GlcN、GalN、Gal和Fuc组成。
HW经Sepharcryl S300凝胶层析分离得到一种具有较高纯度的多糖组分HWS,总糖含量为98.5％,蛋白含量1.1％,相对分子质量为574.5 kD。在对其基本理化性质进行研究的基础上,对HWS采用甲基化和气质联用(GC/MS)分析、高碘酸氧化和Smith降解、红外光谱(FT-IR)、核磁共振(NMR)技术对其结构进行了深入研究,证实HWS是以(1→4)-α-D-Glcp为主链,含有少量的→2,4)-Glcp-(1→和→6)-p-Glc(1→分支的葡聚糖,平均每6个主链糖残基含有1个分支。
采用甲基化和GC/MS分析、FT-IR、2D NMR技术对MT0-A1的结构进行了初步研究,结果表明:MT0-A1主要含有→3)-β-D-GlcNAcp-(1→;α-L-Fucp-(1→和→3)-α-L-Fucp:→2)-α-D-Galp-(1→:→3)-α-D-Manp-(1→和→4)-α-D-GalNAcp-(1→等结构单元。
虽然紫贻贝多糖理化性质和生物活性的初步研究已有报道,但有关紫贻贝多糖较为系统的理化性质、分离纯化和结构方面的研究报道尚不多见。本文对7种具有较高纯度的多糖组分进行了理化性质分析,并对HWS和MT0-A1的结构与组成进行了较系统的研究,为紫贻贝多糖的进一步研究与开发和生物活性的深入研究提供了参考和借鉴。
紫贻贝;多糖;提取分离;生物活性;理化性质
中国海洋大学
硕士
药物化学
赵峡
2011
中文
R284.2
113
2011-10-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）