海洋微藻的分离、无菌化和异养培养
为了得到无菌藻株并进行异养实验,本实验采用抗生素法对小球藻C95(Chlorella sp.),三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)和球等鞭金藻8701(Isochrysis galbana)三种微藻进行了无菌化实验。研究选取了卡那霉素(kanamycin)、链霉素(streptomycin)、新霉素(neomycin)、青霉素(penicillin)和庆大霉素(gentamycin)五种抗生素,在终浓度100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L时分别对三种藻进行了抗生素敏感性分析,实验结果表明五种抗生素均对小球藻C95产生了不同程度的抑制;除链霉素外,其它四种抗生素对三角褐指藻均有一定程度的促进作用;球等鞭金藻8701对五种抗生素敏感性变化较大,链霉素在低浓度时有明显促进作用(P＜0.01),卡那霉素几乎没有任何影响,其它三种抗生素在高浓度时均有不同程度的抑制作用。
从小球藻C95、三角褐指藻和球等鞭金藻8701中分别分离出5株、5株和3株细菌菌株,分别标记为A1-A5、B1-B5和C1-C3,并进行了抗生素的抑菌效果实验。结果表明在小球藻中只有新霉素在高浓度时可以很好的抑制A4,但同时新霉素对A1无效,其它四种抗生素均能有效抑制除A4菌株外的其他菌株。三角褐指藻中卡那霉素能有效抑制B4菌株,但对B3无效,新霉素可以有效抑制4株细菌,其它3种抗生素只能有效抑制3株细菌。球等鞭金藻8701中的C3仅在高浓度的新霉素中才能被有效抑制,但新霉素对C1无效,庆大霉素对3株细菌均不能有效抑制,卡那霉素仅抑制C1,链霉素和青霉素可有效抑制C1和C2。
结合抑菌效果,针对每株藻设计出两组抗生素组合进行无菌化实验,每组三种抗生素,分三次加入。结果表明该组合可以抑制大部分细菌,但不能完全杀灭。根据此实验结果对下一步实验进行调整。采用重新设计抗生素组合,或在f/2异养培养基上追加相同抗生素组合,或传代追加三次抗生素组合,用这三种方法进一步对藻株进行无菌化培养。结果表明,重新设计的抗生素组合及f/2异养培养基上追加抗生素使小球藻C95达到了无菌化的效果,而追加抗生素组合实验中的细菌未减反增。进一步对无菌化小球藻C95在两种异养培养基上进行了异养驯化。经过20天的驯化,小球藻C95可进行异养培养。且在两种异养培养基中,小球藻C95的生长差别较大,表明培养基是影响异养培养的一个重要因素。
本研究同时还分别从青岛和海南两地采集水样并采用平板法进行了微藻的分离,共分离得到24株微藻。采用干重法对其中20株微藻进行了生物量的测定,同时利用ITS序列对其中13株藻的系统发生及分类地位进行分析。结果显示13株藻共聚为三支,分属于栅藻科链带藻属(Desmodesmus)、盘苔藻属(Blidingia)和小球藻属(Chlorella)。实验还利用无菌化实验的结果对其中的4株分离藻进行了无菌化处理,并获得了1株无菌藻株。
海洋微藻;无菌化实验;异养培养;菌株分离;ITS;抑菌效果
中国海洋大学
硕士
渔业
李赟
2011
中文
S968.4;Q93-335
75
2011-10-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）