凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)在病原菌和多巴胺作用下血蓝蛋白酚氧化酶免疫活性的研究
本文系统研究了凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)在病原菌和多巴胺作用下血蓝蛋白酚氧化酶免疫活性的变化。主要探讨了(1)p-APMSF对凡纳滨对虾酚氧化酶原激活系统(proPO)和血蓝蛋白酚氧化酶活性的影响;(2)脂多糖、多巴胺与P-APMSF联合作用对凡纳滨对虾血淋巴酚氧化酶系统和血蓝蛋白酚氧化酶活性的影响;(3)病原菌胁迫对血蓝蛋白酚氧化酶免疫活性的研究;(4)凡纳滨对虾在多巴胺作用下血蓝蛋白酚氧化酶免疫活性的研究。主要结果如下:
1.p-APMSF对凡纳滨对虾酚氧化酶原激活系统和血蓝蛋白酚氧化酶活性的影响实验通过不同浓度的p-APMSF与血细胞和血淋巴分别作用,研究p-APMSF对血细胞酚氧化酶活性、血淋巴酚氧化酶活性和血蓝蛋白酚氧化酶活性的影响。验证了p-APMSF抑制剂具有抑制血细胞酚氧化酶原转变成酚氧化酶而不影响血蓝蛋白酚氧化酶活性的性质。并且,通过不同浓度的设置,确定了p-APMSF最适抑制浓度为1Oumol/L。
2.脂多糖、多巴胺与p-APMSF联合作用对凡纳滨对虾血淋巴酚氧化酶系统和血蓝蛋白酚氧化酶活性的影响研究发现脂多糖(LPS)和多巴胺(DA)对凡纳滨对虾总血细胞数量和proPO系统影响显著(P＜O.05)。实验分别用LPS、DA和p-APMSF联合孵育血淋巴,结果表明脂多糖、多巴胺与p-APMSF联合作用使血细胞酚氧化酶原活性明显降低,而胞吐酚氧化酶活性则显著升高,但对血蓝蛋白酚氧化酶活性无影响。
3.凡纳滨对虾在病原菌胁迫下血蓝蛋白酚氧化酶免疫活性的研究研究结果表明:注射哈维氏弧菌和p-APMSF对凡纳滨对虾的血蓝蛋白的合成(包括血蓝蛋白含量、p75和p77亚基表达和血蓝蛋白mRNA表达)、以及血淋巴酚氧化酶(PO)活力、血细胞酚氧化酶原(proPO)活力和血蓝蛋白酚氧化酶活2(HdPO)的影响显着(P＜0.05),而对照组无显着变化。各处理组p75和p77亚基以及血蓝蛋白mRNA的表达在实验时间内均呈现峰值变化,p-APMSF注射组的p75和p77亚基在24h时达到最大值、30h后稳定;而两混合注射组的p75和p77亚基均在30h达到最大值、36h后趋于稳定。各处理组稳定后均显著高于对照组,且p-APMSF与菌混合注射组显著高于其他处理组。
在实验时间内各处理血蓝蛋白酚氧化酶活性均表现出峰值变化,p-APMSF注射组、p-APMSF与菌混合注射组以及生理盐水和菌混合注射组分别在18和24h达到最大值,且于48h恢复至对照组水平。P-APMSF注射组注菌后血蓝蛋白酚氧化酶活性继续升高,至24h达到最大值,且显著高于其他各组。
本文研究表明p-APMSF注射组6.24h内血蓝蛋白含量均低于对照组水平,而血蓝蛋白mRNA表达显著升高,血蓝蛋白酚氧化酶活性也显著高于对照水平,说明在外界刺激下血蓝蛋白启动合成机制,大量合成血蓝蛋白,除供氧外还用于参与免疫防御,在本实验中,当再次注射病原菌后这种趋势就更加显著,说明血蓝蛋白在调节免疫方面具有重要作用。
4.凡纳滨对虾在多巴胺作用下血蓝蛋白酚氧化酶免疫活性的研究研究结果表明:注射DA和p-APMSF对血蓝蛋白含量,血蓝蛋白合成,血淋巴酚氧化酶活性和血蓝蛋白酚氧化酶活性影响显著。
此外,注射DA实验与注射哈维氏弧菌实验在结果上存在相似的趋势。这不仅说明了注射DA会使凡纳滨对虾血蓝蛋白合成增加,而且说明了DA像病原菌一样,可以引发免疫防御,与甲壳动物免疫机能有密切相关。
凡纳滨对虾;多巴胺;脂多糖;眙维氏弧菌;血蓝蛋白酚氧化酶;p-APMSF;免疫活性
中国海洋大学
硕士
水产养殖
潘鲁青
2011
中文
S945.12;S942.5
86
2011-10-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）