PCF经ROS/UCP2/cytoC信号通路对UVA诱导的HaCaT细胞凋亡的调控
目的:复制8J·cm-2UVA辐射损伤HaCaT角质形成细胞的凋亡模型,探究线粒体解偶联蛋白2(UCP2)在UVA诱导的HaCaT细胞凋亡中的调控作用,确定线粒体解偶联蛋白2对活性氧的调控,从线粒体呼吸链复合酶、活性氧(ROS)、线粒体解偶联蛋白2(UCP2)、细胞色素C(cytoC)、凋亡蛋白酶激活因子(Apaf-1)的角度,研究扇贝多肽(PCF)保护UVA诱导的HacaT细胞凋亡的分子机制。方法:复制8J·cm-2 UVA照射HaCaT细胞后18h的最佳凋亡模型,实验设计分为:对照组、UVA模型组、PCF组(5.69,2.84,1.42 mmol·L-1PCF)、抑制剂组(5mmol·L-1 NAC)。采用琼脂糖凝胶电泳法和Hochest33258荧光染色观察UVA引起的细胞凋亡形态学变化及细胞凋亡率；2,7-二氯氢化荧光素二酯荧光探针,检测PCF对UVA损伤细胞后ROS生成量的影响；RT-PCR检测胞浆谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、过氧化氢酶(CAT)mRNA的表达；免疫印迹法检测胞浆超氧化物歧化酶(Cu,Zn-SOD),UCP2,凋亡蛋白酶激活因子(Apaf-1),细胞色素C(cytoC)的蛋白表达；用紫外分光光度法测定呼吸链复合酶1(NADH:Q还原酶)的活性。结果:UVA模型组HaCaT细胞出现明显的凋亡梯形条,细胞核发生明显固缩,PCF组梯形条带明显减少同时还提高了Cu,Zn—SOD、GPx和CAT的表达；UVA辐射HaCaT细胞后18h凋亡模型细胞中的ROS含量明显升高；1.42-5.69 mmol·L-1剂量范围内的PCF可明显抑制UVA引起的细胞内活性氧的产生；UVA模型组中UCP2的表达明显增高而正常对照组及预先加入NAC活性氧清除剂的细胞中UCP2几乎不表达,1.42—5.69 mmol·L-1剂量范围内的PCF可剂量依赖性提高UCP2的蛋白表达；UVA模型组cytoC向胞浆的释放量明显增多,Apaf-1表达量升高1.42—5.69 mmol·L-1剂量范围内的PCF可明显抑制cytoC向胞浆释放及Apaf-1蛋白的表达；UVA模型组呼吸连复合酶Ⅰ的活性明显下降PCF组可以剂量依赖性提高复合酶的活性抑制UVA诱导的HaCaT细胞凋亡。结论:PCF可以通过提高细胞内的过氧化物酶(Cu,Zn-SOD、GPx和CAT)的表达抑制UVA诱导的HaCaT细胞凋亡线粒体解耦蛋白2参与了UVA诱导的HaCaT细胞凋亡的调控机制,UVA辐射损伤HaCaT细胞,细胞中会产生大量的ROS,ROS可以激活UCP2的表达,PCF可以经ROS／UCP2／cytoC这一信号通路抑制8J·cm-2UVA辐射诱导的HaCaT细胞凋亡,并在1.42-5.69mmol·L-1剂量范围内呈剂量依赖性。
扇贝多肽;呼吸链复合酶;信号通路;细胞凋亡;凝胶电泳
中国海洋大学
硕士
生药学
于文功
2011
中文
R282.77
72
2011-10-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）