不同血清分型链球菌荚膜多糖的提取分离与结构组成初步分析
链球菌为兼性厌氧的革兰氏染色阳性菌,其可引起猪及人类的多种疾病。荚膜多糖有抗吞噬活性,在猪链球菌致病过程中发挥重要作用,因此,不少学者正努力探索预防这些疾病的途径,以荚膜多糖为基础的疫苗研制工作正在展开。本文对1型、1／2型和14型猪链球菌荚膜多糖进行提取分离,通过多种提取和分离技术及免疫检测手段,获得了成分较为均一的具有免疫活性的各型荚膜多糖组分T1、T1／2和T14,然后对各个组分糖含量、蛋白含量、唾液酸含量、单糖组成、相对分子质量等理化性质进行分析,并采用多种化学分析及现代仪器分析技术,初步确定了1／2型和14型猪链球菌荚膜多糖化学结构。
采用不同酶解法和钙盐分步沉淀法依次对静置培养的1型、1／2型和14型猪链球菌菌体进行提取,对提取得到的荚膜粗多糖组分CPS1、CPS1／2和CPS14分别进行了初步的理化性质研究。对CPS1、CPS1／2和CPS14分别采用Q Sepharose FastFlow离子交换层析柱和Sepharcryl S-300凝胶渗透层析柱进一步纯化,其中得到的组分T1、T1／2和T14经斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)证明分别为1型、1／2型和14型猪链球菌荚膜多糖。经测定荚膜多糖T1、T1／2和T14相对分子质量分别为262.5 kD、512.7 kD和487.4 kD,糖含量分别为29.3％、96.6％和53.5％,蛋白含量分别为3.1％、4_3％和0.5％,唾液酸含量之比分别为1:2.67:0.19。经PMP柱前衍生高效液相色谱法分析,T1单糖组成摩尔数比为Gal:GlcN:Glc:Rha:GalN=1:1.46:0.79:2.13:0.27,T1／2单糖组成摩尔数比为Gal:GlcN:GIc:Rha:GalN=1:0.63:0.6:0.43:0.56,T14单糖组成摩尔数比为Gal:GleN:GIc:Rha=1:0.46:0.34:0.08。在对各型荚膜多糖组分基本理化性质进行研究的基础上,对组分T1／2和T14进行红外光谱和核磁共振波谱分析,对其相应脱唾液酸后的产物DT1／2和DT14进行核磁共振波谱分析和气相质谱分析,通过多种化学分析方法和现代仪器分析技术对荚膜多糖T1／2和T14的结构进行了较为系统的研究。结果表明,T1／2主要含有→3,4)Gal-(1→,Gal-(1→,→3,4)Rha-(1→,→3)Glc-(1→这四种结构单元,同时含有少量的→2,3)Rha-(1→,→4)Rha-(1→等分支点；T14主要含有Gal-(1→,→3,6)Gal-(1→,→3)Glc-(1→这三种结构单元,同时含有少量的→2,4)Rha-(1→分支点。另外,本实验中还得到T1-1、T1／2-B、T14-B和T14-C多糖组分,并对其糖含量、蛋白含量、唾液酸含量、单糖组成、相对分子质量等理化性质进行了研究。
目前对猪链球菌荚膜多糖的研究主要集中在血清2型上,对其它具有致病性的1型、1／2型和14型猪链球菌的研究并不多,特别是对其分离纯化和结构分析方面的研究报道尚不多见。本文对1型、1／2型和14型猪链球菌荚膜多糖(T1、T1／2和T14)及其相关无免疫原性的多糖组分(T1-B、T1／2-B、T14-B和T14-C)进行了初步研究,通过对1／2型和14型猪链球菌荚膜多糖的结构进行较为系统的研究,可以为以荚膜多糖为基础的疫苗研制提供更多的线索和依据,进而推动未来多价疫苗和结合疫苗的发展。
猪链球菌;荚膜多糖;提取分离;结构分析;免疫活性
中国海洋大学
硕士
制药工程
赵峡
2011
中文
TQ464
110
2011-10-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）