海洋硫酸多糖不同脱硫方法的细弱研究

刘鑫

中国海洋大学

摘要：

本文以κ-卡拉胶为原料,比较研究了PMA法(苯并四甲酸)、CTMS(三甲基氯硅烷)法和DMSO-甲醇法在硫酸多糖脱硫效果中的优劣。结果发现,κ-卡拉胶经三种方法脱硫后,产物得率分别为62％、50.6％、36.7％；产物含硫量分别为4.6％、14.4％、14.1％；产物分子量分别为4.75kDa,22.3kDa,15.7kDa；结合红外光谱分析表明,PMA法脱硫产物IR图谱中1250cm-1(S=O伸缩振动)峰最小。结果说明,PMA法脱硫效果最好,产物得率最高,多糖降解率低,为一种理想的脱硫方法。
应用PMA法对高硫酸根含量的λ-卡拉胶(每2个糖残基含有3个硫酸酯基)进行脱硫验证实验,瓜分析表明脱硫效果良好,进一步对脱硫后多糖进行酸法降解,应用凝胶层析及离子交换色谱分离技术纯化,采用Superdex peptide色谱柱分离脱硫寡糖:寡糖结构采用电喷雾离子化质谱(ESIMS)进行结构分析,表明所得dsλ2-dsλ6寡糖为脱硫后的二糖至六糖半乳寡糖,且具备脱硫λ-卡拉胶骨架结构特征。通过糖芯片技术发现,脱硫前后寡糖与RCA120结合效率不同,表明硫酸基在糖与蛋白作用中具有重要贡献,也为该方法获得脱硫多糖与寡糖,从事构效关系研究提供了方法学基础。
应用PMA方法,对不同结构海洋硫酸多糖如τ-卡拉胶、海蒿子硫酸化岩藻聚糖、裂弧菌硫酸半乳聚糖进行脱硫实验,应用红外光谱技术对产物进行脱硫效果分析,表明脱硫效果理想。在对τ-卡拉胶脱硫研究中发现,当在PMA法反应中加入尿素后,可以优先脱去τ-卡拉胶C-2位硫酸根而保留C-4位硫酸根。
通过本文的系统研究,表明了PMA法是一种理想的脱硫方法,不仅可以高效脱除多糖中所有位置硫酸基,而且加入改进剂后具有选择性脱硫效果,为不同硫酸多糖结构分析,尤其甲基化分析中确定多糖连接方式提供了前提。本方法为制备不同硫酸基含量多糖,从事构效关系研究以及海洋糖类药物开发提供了基础。

关键词：海洋硫酸多糖;苯并四甲酸;红外光谱;离子交换色谱;凝胶层析

授予单位：中国海洋大学

授予学位：硕士

学科专业：制药工程

导师姓名：于广利

学位年度：2011

语种：中文

分类号：R282.77

页数：59

在线出版日期：2011-10-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）