栉孔扇贝(Chlamys farreri)精巢细胞体外培养的初步研究
贝类细胞培养主要是在研究各种经济贝类病害病理中发展起来的,虽然目前贝类细胞培养可以满足病毒学和一些生理学研究的基本要求,但是仍然不能像其它门类动物一样成功地建立细胞系,这在很大程度上限制了贝类功能基因等的研究。贝类细胞不能成功建系的原因之一是细胞在体外很少增殖,干细胞具有旺盛的增殖能力和分化潜能,因此选择生殖腺中的生殖干细胞进行贝类体外培养,预期可在贝类细胞培养方面建立一些经验。
论文以栉孔扇贝精巢组织为培养对象,比较了3种接种方法(常规植块法、倒置植块干贴法、5％FBS孵育植块接种法)对精巢组织的培养效果,得出:5％FBS孵育接种法能增强植块周围细胞的迁出,迁出量最大可达对照组的1.5倍,培养7d后细胞的存活率为对照组的3倍以上,精巢细胞在体外最长存活16 d左右；
以L-15为基本培养基,比较了3种添加物(EGF、牛胰岛素、维生素C)对栉孔扇贝精巢组织细胞的培养效果,正交实验结果显示,EGF利于细胞的迁出和贴壁,30 ng／ml EGF组细胞迁出距离最大,为400μm,贴壁率最高达82.5％；同一EGF浓度下,10μg／ml胰岛素可较好的促进细胞迁出、贴壁,并维持细胞的高存活率。在30 ng／ml EGF各组观察到疑似分裂末期的细胞,以及早期生精细胞的增殖现象,但随着培养细胞逐渐分化,细胞最终出现空泡而退化,在30 ng／mlEGF、10μg／ml牛胰岛素、25μg／ml维生素C条件下少数细胞存活20 d后出现退化。其余各组细胞存活时间维持在16 d左右。
本文首次采用差速贴壁分离的方法对栉孔扇贝的生精细胞进行了分离培养,形态学和Cf-vasa原位杂交鉴定,分离培养产物中以生精细胞为主,由此确定这是一种有效地获得大量纯度较高的生精细胞的方法,为下一步筛选更有效的栉孔扇贝精原细胞体外培养体系奠定了基础。
栉孔扇贝;精巢组织;体外培养;生精细胞;Cf-vasa鉴定;细胞分化
中国海洋大学
硕士
生物工程
张志峰
2011
中文
Q959.21;Q954.43
69
2011-10-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）