促性腺激素受体在半滑舌鳎繁殖周期中的作用研究

陈晓燕

中国海洋大学

摘要：

半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis Günther)是我国近海底层的大型名贵经济鱼类。本实验采用分子生物学、组织学、免疫组织化学和激素放射免疫测定方法，综合分析了促性腺激素受体(FSHR和LHR)在半滑舌鳎繁殖周期中的功能作用，所得结果与结论如下：
1.半滑舌鳎促滤泡激素受体(FSHR)基因的克隆和表达
本实验克隆了半滑舌鳎促滤泡激素受体(FSHR)基因cDNA的全长序列序列(3105bp)，编码704个氨基酸，含有典型的跨膜螺旋结构区域(TM helix)，属于糖蛋白激素受体(GHR)家族。组织表达分析表明，FSHR基因表达广泛，除在性腺中大量表达外，其他非性腺组织也有表达，尤其以脾、肾、头肾表达最为强烈。
通过RT-PCR方法首次对FSHR mRNA在雌性半滑舌鳎的卵巢和脑2种组织；雄性半滑舌鳎的精巢、脑和脾3种组织中的表达进行了周年变化分析。结果显示，FSHR mRNA在上述5种组织中的表达均呈周期性变化。通过与血浆中E2含量、T含量和性腺发育GSI指数综合分析，探讨了FSHR在半滑舌鳎繁殖周期中的生理作用。
2.半滑舌鳎促黄体激素受体(LHR)基因的表达分析
采用巢式RT-PCR法克隆了半滑舌鳎促黄体激素受体(LHR)基因部分序列，该基因片段长度为614bp，编码204个氨基酸，含有典型的跨膜螺旋结构区域(TMhelix)，属于糖蛋白激素受体(GHR)家族。组织表达分析表明，LHR基因在半滑舌鳎的卵巢、精巢、肝脏、胃、肠、鳃、心、脾、肾、头肾和脑中均有表达，表达量有所不同，以脾和肾中表达量最丰富。
通过RT-PCR方法首次对LHR mRNA在雌性半滑舌鳎的卵巢、脑、脾和肾4种组织；雄性半滑舌鳎的精巢和脾2种组织中的表达进行了周年变化分析。结果显示，FSHR mRNA在上述6种组织中的表达均呈周期性变化。通过结合性腺发育GSI指数和FSHR的基因表达特点，分析了LHR在半滑舌鳎繁殖周期中的生理作用。
3.半滑舌鳎性腺促性腺激素受体的免疫组织化学研究
3.1促滤泡激素受体(FSHR)在半滑舌鳎性腺中的免疫组织化学定位
FSHR在Ⅱ时相卵母细胞的滤泡膜中有较弱的的分布；随着卵母细胞的发育，阳性反应越来越强烈，在Ⅳ时相和Ⅴ时相卵母细胞的胞质和滤泡层中都有FSHR阳性反应，而且Ⅴ时相卵母细胞的颗粒细胞层阳性反应比膜细胞层强。到了Ⅵ时相卵母细胞时，滤泡层中反应微弱，胞质阳性反应强烈。
在精巢的各个发育阶段中，FSHR在精原细胞、精母细胞、精子细胞及精小叶间质处均呈免疫阳性反应，在Ⅴ期精巢时间质细胞反应最强烈；而在发育各期中的精原细胞核仁、精母细胞核及精子均呈免疫阴性反应。
FSHR在半滑舌鳎卵巢和精巢中免疫组化阳性反应的强弱变化与FSHR基因在卵巢和精巢中表达变化模式一致，通过以上结果表明，半滑舌鳎FSRH主要在卵母细胞最后成熟和排精时起主要作用。
3.2促黄体激素受体(LHR)在半滑舌鳎性腺中的免疫组织化学定位
LHR在Ⅱ时相卵母细胞滤泡膜有较弱表达，在Ⅲ时相卵母细胞的滤泡层和胞质中阳性反应强烈，随着卵母细胞的发育FSHR阳性反应逐渐减弱，在Ⅴ时相卵母细胞时只有滤泡层的膜细胞层检测到FSHR阳性反应，Ⅵ期卵巢中卵母细胞的滤泡层有较弱阳性反应。
在各个发育阶段精巢的精原细胞、精母细胞、精子细胞和细胞间质有不同程度的IMR免疫阳性反应，在Ⅴ期精巢的间质处阳性反应最强烈。
LHR在半滑舌鳎卵巢和精巢中免疫组化阳性反应的强弱变化与LHR基因在卵巢和精巢中表达变化模式一致，通过以上结果表明，半滑舌鳎LHR主要在卵黄发生和排精时起重要作用。

授予单位：中国海洋大学

授予学位：硕士

学科专业：水产养殖

导师姓名：温海深

学位年度：2010

语种：中文

分类号：Q959.486

在线出版日期：2011-06-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）