κ-卡拉胶寡糖及其衍生物的制备与抗疱疹病毒活性研究
本文针对抗单纯疱疹病毒药物毒性相对较大、容易产生耐药株的缺点，以及硫酸多糖的广谱抗病毒活性，利用酶降解方法降解k-卡拉胶，制得k-卡拉胶寡糖。使用不同的磺化方法和脱硫酸基方法修饰k-卡拉胶寡糖，分别得到k-卡拉胶寡糖磺化衍生物和k-卡拉胶寡糖脱硫酸基衍生物。利用单纯疱疹病毒HSV-1研究k-卡拉胶寡糖及其衍生物的抗病毒活性，同时研究了它们的抗凝血活性。从而筛选出具有较高抗单纯疱疹病毒的k-卡拉胶寡糖衍生物。主要结果如下：
1、利用MCA-2菌株产生的酶降解k-卡拉胶，可以专一、高效的得到k-卡拉胶酶解片段，使用乙醇分级、Bio-Gel P-4凝胶过滤介质纯化后，得到不同分子量的k-卡拉胶寡糖。通过IR和化学方法分析，证明酶解法不会改变k-卡拉胶的结构。
2、以k-卡拉胶寡糖为原料，采用不同试剂组合、不同反应温度和不同反应时间为变量，研究最佳的制备k-卡拉胶寡糖磺化衍生物和k-卡拉胶寡糖脱硫酸基衍生物的方法。
实验发现，影响k-卡拉胶寡糖磺化衍生物制备的最重要的因素是反应温度，其次是反应时间，最后是试剂组合；而最能影响k-卡拉胶寡糖脱硫酸基衍生物制备的因素也是反应温度，其次是试剂组合，最后是反应时间。
k-卡拉胶寡糖磺化衍生物的最佳制备方法为使用氯磺酸-甲酰胺试剂组合，反应温度为70℃，反应时间为6h；k-卡拉胶寡糖脱硫酸基衍生物的最佳制备方法为使用无水二甲基亚砜-吡啶-1，2，4，5-苯四酸-氟化钠试剂组合，反应温度为100℃，反应时间为4h。
3、利用单纯疱疹病毒HSV-1和Vero细胞进行体外实验，将不同剂量的卡拉胶寡糖及其衍生物分别作用于病毒增殖的不同周期，共研究了卡拉胶寡糖及其衍生物对病毒的直接作用、对病毒吸附细胞的抑制作用和对病毒复制的抑制作用三个作用阶段。初步研究了k-卡拉胶寡糖及其衍生物的抗病毒活性及抗疱疹病毒的机理。
实验发现，k-卡拉胶寡糖及其衍生物对Vero细胞毒性极低。k-卡拉胶寡糖及其磺化衍生物对单纯疱疹病毒HSV-1有抑制作用，主要体现在抑制病毒吸附细胞的这一步骤；在相同浓度下，k-卡拉胶寡糖磺化衍生物的抑制病毒吸附细胞作用明显强于k-卡拉胶寡糖。同时，对k-卡拉胶寡糖或其磺化衍生物而言，同一种寡糖对病毒吸附细胞的抑制作用随寡糖浓度的增加而增加。而k-卡拉胶寡糖脱硫酸基衍生物对单纯疱疹病毒HSV-1无明显作用。
4、对卡拉胶寡糖及其衍生物的部分凝血活酶时间(t APTT)和凝血酶原时间(t PT)进行测定，以反映它们的抗凝血活性。结果表明，卡拉胶寡糖及其衍生物对内源性凝血系统具有一定的作用，并且这种作用随寡糖中硫含量的增加而愈加显著；而对外源性凝血系统无显著作用。
k-卡拉胶寡糖;脱硫酸基;单纯疱疹病毒;衍生物
中国海洋大学
硕士
水产品加工与贮藏工程
牟海津
2009
中文
R965.2
76
2009-10-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）