雌激素受体和雄激素受体在养殖雄性半滑舌鳎繁殖生理中的作用研究
半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis Giinther)是我国近海底层的大型名贵经济鱼类。本文以人工养殖雄性半滑舌鳎为研究对象，运用组织学、免疫组织化学、激素放射免疫测定方法以及分子生物学方法，对半滑舌鳎的精巢、血浆性类固醇激素及其受体进行了研究和分析，所得结果与结论如下：
1.养殖半滑舌鳎精巢发育周年变化的组织学研究
半滑舌鳎具有精巢一对，与大多数硬骨鱼类的精巢一样，半滑舌鳎精巢为小叶形结构，精小囊结构不明显。雄性半滑舌鳎具有贮精囊结构，贮精囊由精巢背部向前延伸出去，长度与精巢相当，贮精囊中无精小叶结构，由平滑肌和结缔组织围成大小不一的腔隙，腔中充满成熟精子。精巢输出管汇集在精巢的一侧，成熟精子经小叶腔汇到输出管中，再由输出管流入贮精囊。
半滑舌鳎精子的发生经历精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞以及精子5个典型的发育阶段，但精巢中精细胞的发育并不同步。养殖半滑舌鳎精巢发育与野生雄鱼相比具有滞后性，繁殖季节从10月份一直持续到次年的2月份，此后精巢进入重复发育阶段，8月份开始启动生精活动。
2.半滑舌鳎精巢雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)、雄激素受体(AR)的免疫组织化学研究
2.1雌激素受体α(ERα)在精巢及精细胞中免疫组织化学定位
在性成熟半滑舌鳎精巢的各个发育阶段中，ERα在精原细胞、精母细胞、精子细胞及精小叶间质处均呈免疫阳性反应，而在发育各期中的精原细胞核仁、精母细胞核及精子均呈免疫阴性反应。
2.1雌激素受体β(ERβ)在精巢及精细胞中免疫组织化学定位
精原细胞、精母细胞、精子细胞和细胞间质在各发育期精巢中有不同程度的ERβ免疫阳性反应存在，但精原细胞核仁及精子均呈免疫阴性反应。
2.2雄激素受体(AR)在精巢及精细胞中免疫组织化学定位
对半滑舌鳎精巢的雄激素受体(AR)进行免疫组织化学定位发现，AR在半滑舌鳎精巢的各个发育时期中的精原细胞、初级精母细胞以及精小叶间质处均有表达。
通过以上结果表明，雌激素受体、雄激素受体在精巢发育和精细胞的增殖过程中起着重要生理作用，为证明性类固醇激素在性腺发育和成熟过程中的重要地位提供了证据。
3.半滑舌鳎中雄激素受体(AR)基因的克隆和表达
本实验克隆了雄激素受体AR基因cDNA的部分序列(434bp)。组织表达分析表明，AR基因在半滑舌鳎的性腺、肝、胃、脾、肾、头肾、肠、鳃、心、脑和肌肉这11种组织中均有表达。表达量有所差异，肾中表达量最丰富，鳃中最少。
通过激素测定，雄性半滑舌鳎血浆中T水平也随着性腺的发育而呈明显的周期性变化，最高峰值出现在2～4月份，之后开始下降，11～1月份为全年最低。
通过RT－PCR方法首次对AR mRNA在雄性半滑舌鳎的精巢、肝、脾、肾和脑5种组织中的表达进行了周年变化分析。结果显示，AR mRNA在5种组织中的表达均呈周期性变化。通过与血浆中T含量、免疫组织化学结果的相互印证，揭示了AR在雄性半滑舌鳎中的。
4.半滑舌鳎中雌激素受体α(ERα)基因的克隆和表达
本实验克隆了雌激素受体ERα基因cDNA的部分序列(454bp)。通过RT－PCR方法检测了ERα基因在雄性半滑舌鳎的精巢、肝、胃、脾、肾、头肾、肠、鳃、心、脑和肌肉11种组织中的表达。结果表明，ERα基因在除鳃和肌肉外的9种组织中都有表达，只是表达量有所差异，肝脏中表达最丰富，头肾中最少。
通过激素测定，雄性半滑舌鳎血浆中E2水平随着性腺的发育而呈明显的周期性变化。含量最高峰值出现在8～10月份，随后开始显著下降，而2～4下降到全年最低水平，5～7月份血浆中E2含量显著上升。
通过RT－PCR方法首次对ERα mRNA在雄性半滑舌鳎的精巢、肝、脾、肾和脑5种组织中的表达进行了周年变化分析。结果显示，ERα基因的mRNA在5种组织中的表达均呈一定的规律性变化，其中在精巢、肝和脾中的表达趋势与E2及GSI的变化曲线呈反相关关系，而与HSI一致。
5.半滑舌鳎中雌激素受体β(ERβ)基因的克隆和表达
通过RT－PCR，从半滑舌鳎精巢中扩增出ERβ片段(525bp)。组织表达结果表明，ERβ基因在精巢、肝、胃、脾、肾、头肾、肠、鳃、心、脑和肌肉11种组织中都有表达，其中肝脏中表达最丰富，头肾中最少。
对ERβ mRNA在雄性半滑舌鳎的精巢、肝、脾、肾和脑5种组织中的表达进行了周年变化分析，结果显示ERβ与ERα的表达规律十分相似。
半滑舌鳎;精巢;雌激素受体α;雌激素受体β;雄激素受体
中国海洋大学
硕士
水生生物
温海深
2009
中文
S917.4
93
2009-09-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）