二十二碳六烯酸-磷脂生物活性的研究
二十二碳六烯酸(DocosahexaenoicAcid)-磷脂主要存在于乌贼的肌肉和卵中，是一种新型的天然产物。磷脂是动植物体内细胞膜的骨架成分，其双分子层结构维持着膜内外物质和信息的传递。DHA具有广泛的生理活性，如降血脂、预防动脉硬化、抑制肿瘤生长和免疫调节等作用。目前已证实，磷脂酰胆碱(Phosphatidylcholine PC)在Sn-2上位结合DHA后能够显示更好的生理活性。本文利用从鸢乌贼卵中提取制备的DHA-磷脂(其中PC含量为64.4％，脂肪酸组成中DHA占30％-40％)，探讨了DHA-PC的抗肿瘤活性及其作用机制；DHA-PC的免疫调节作用；DHA-PC对小鼠智力的影响以及对正常小鼠脂质代谢的调节作用。主要研究结果如下：
以肝癌细胞HepG-2为研究对象，研究了DHA-PC的体外抗肿瘤作用。采用MTT法证明了DHA-PC能够显著抑制HepG-2细胞的增殖(P<0.05，P<0.01)，具有显著的时效和量效关系；采用AO/EB染色法证明DHA-PC能够诱导细胞出现明显的凋亡形态；采用流式细胞术检测证明DHA-PC可以改变细胞的周期，使细胞停滞在G1/G0期。提示DHA-PC对肿瘤细胞的生长有明显的抑制作用，诱导细胞凋亡和细胞G1/G0期阻滞是其主要机制。采用细胞-基质粘附实验法、划痕实验法、Transwell小室重建基底膜侵袭实验、鸡胚尿囊膜实验以及Western-blotting法分别检测肿瘤细胞粘附、迁移、侵袭、血管新生以及肿瘤细胞VEGF的表达等能力，探讨了DHA-PC的体外抗肿瘤转移作用。结果表明：DHA-PC作用HepG-2细胞48h后，减弱了细胞与基质的粘附作用，其效应呈浓度依赖性(P<0.05，P<0.01)，显著抑制HepG-2细胞的迁移能力(P<0.05)，降低HepG-2细胞的侵袭能力(P<0.05，P<0.01)，显著抑制血管的新生，呈现浓度依赖效应，下调肿瘤细胞血管内皮细胞生长因子(Vascular EndothelialGrowth Factor，VEGF)的表达。提示DHA-PC能够抑制肿瘤细胞的转移，其作用机制可能与降低肿瘤细胞的粘附、迁移、侵袭能力、抑制肿瘤血管新生以及肿瘤细胞VEGF的表达有关。
利用S180建立移植性肿瘤小鼠模型，研究了DHA-PC的体内抗肿瘤作用。采用不同剂量(50、200mg/kg.bw)的DHA-PC灌胃荷瘤小鼠14d，结果表明：DHA-PC可明显抑制小鼠肿瘤的生长，其平均抑瘤率为38.06％，能够提高肿瘤小鼠血清和肝脏中抗氧化酶GST、GSH-PX(P<0.05，P<0.01)活力和GSH(P<0.05，P<0.01)的含量。肿瘤组织HE染色发现，DHA-PC组癌细胞出现明显褪变；免疫组化染色表明，DHA-PC组肿瘤血管密度显著低于模型组(P<0.05)。提示DHA-PC能够抑制小鼠体内肿瘤的生长，其作用机制与提高体内的抗氧化水平，降低肿瘤血管密度，抑制肿瘤血管的新生有关。
探讨了DHA-PC对荷瘤小鼠的免疫调节作用。结果表明：不同剂量(67、134和268mg/kg.bw)的DHA-PC能够提高小鼠脾指数(P<0.05)；显著提高荷瘤小鼠血清溶血素含量(P<0.01)；提高迟发型变态反应(P<0.05，P<0.01)；促进巨噬细胞的吞噬能力(P<0.01)。提示DHA-PC能全面调节机体的特异性和非特异性免疫功能。
利用腹腔注射东莨菪碱的方法建立实验性痴呆小鼠模型，灌胃不同剂量(50、100和200 mg/kg.bw)的DHA-PC，观察了其对小鼠智力发育的影响。结果表明：与模型对照组比较，DHA-PC能够显著降低大脑中MAO(P<0.01)、TChE(P<0.01)活力，提高SOD(P<0.05，P<0.01)活力，增加大脑组织中DHA的含量，降低n-6/n-3 PUFAs的比例。提示DHA-PC能够改善模型小鼠的智力。
研究了DHA-PC对正常小鼠脂质代谢的调节作用。利用试剂盒法分别检测了血清和肝脏中TC、TG含量，利用气相分析法检测了肝脏中主要脂肪酸的组成。结果表明：与正常对照组比较，DHA-PC可以显著降低小鼠血清和肝脏中的TC、TG含量(P<0.01)，提高肝脏组织中DHA含量(P<0.01)；与大豆磷脂对照组比较，可以显著降低小鼠血清中TC、TG含量(P<0.01)，肝脏中TC、TG含量(P<0.05，P<0.01)，提高肝脏组织中DHA含量(P<0.01)；与DHA对照组比较，DHA-PC能够提高血清中HDL-C含量(P<0.05)，显著降低肝脏中TG含量(P<0.05)。提示DHA-PC可以有效改善正常小鼠的脂质代谢水平，且作用效果要优于单独的DHA和PC。
本论文首次全面系统的研究了鸢乌贼卵中DHA-PC的生物活性，填补了国内空白。为水产品加工废弃物的高值化利用开辟了一个新的渠道，为其应用于保健品、医药等领域的研究奠定了实验基础。
二十二碳六烯酸-磷脂;生物活性;磷脂酰胆碱;体外抗肿瘤
中国海洋大学
硕士
食品科学
王静凤
2009
中文
R151
93
2009-09-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）