三种弧菌外膜蛋白K基因的克隆、表达及其潜在应用的研究
本研究根据哈维氏弧菌0mpK基因序列，3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因序列和酒精酵母菌表面展示质粒载体pYD1上的多克隆位点设计引物，从哈维氏弧菌基因组DNA和质粒pET-OmpK-GAPDH中通过PCR技术扩增外膜蛋白基因和融合基因0mpK-GAPDH，把该基因连接到表面展示质粒载体pYD1上，转化用于表面展示的酵母EBY100菌株中，以不含载体和含空载体的酵母菌为对照，加2％(w/v)的半乳糖诱导36 h后，利用免疫荧光法在荧光显微镜下检测到了展示在酵母菌细胞表面上的外膜蛋白。
同时利用大肠杆菌表达载体pQE-30，构建了哈维氏弧菌，副溶血弧菌，溶藻胶弧菌三种弧菌外膜蛋白K的重组大肠杆菌，IPTG诱导4h后能够在大肠杆菌M15中高效表达了的融合蛋白。通过诱导表达用Ni2+亲和柱纯化了重组的三种弧菌的外膜蛋白K，SDS-PAGE检测分子量分别为29 kDa，30 kDa，30 kDa。
用展示有哈维氏弧菌外膜蛋白k的酵母菌细胞对大菱鲆进行注射免疫，采用间接ELISA的方法，利用上述制备的重组哈维氏弧菌外膜蛋白k检测免疫鱼类血清中抗体的产生；间接ELISA对大菱鲆特异抗体检测结果表明，实验组有效价，说明这种以酒精酵母为载体的活疫苗可以刺激鱼类产生一定得抗体，但其平均效价却很低。
弧菌外膜蛋白K;基因表达;免疫荧光;大菱鲆;活疫苗;注射免疫
中国海洋大学
硕士
海洋生物学
池振明
2009
中文
S942.5
81
2009-09-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）